[發(fā)明專利]一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710201402.1
• 申請(qǐng)日: 2017-03-30
• 公開（公告）號(hào): CN107095312A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜南;喬慧;遲乃玉;遲彥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號(hào): A23L33/18
• 分類號(hào): A23L33/18;C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 大連八方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司21226
• 代理人: 衛(wèi)茂才

1.一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑，其特征在于，所述多肽制劑由南極磷蝦粉經(jīng)彈性蛋白酶與絲氨酸羧肽酶酶解產(chǎn)生的多肽組成，所述多肽分子量在7000Da以下。

2.一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑的制備方法，其特征在于，制備工藝是以冷凍南極磷蝦粉為原料，經(jīng)粉碎、電子束輻照-超聲波處理、復(fù)合酶解、超濾、冷凍干燥制得成品，具體包括以下步驟：

1)粉碎：將冷凍南極磷蝦粉用粉碎機(jī)粉碎成細(xì)微的粉末；

2)電子束輻照-超聲波處理：將步驟1)得到的南極磷蝦粉末置于電子直線加速器中進(jìn)行輻照處理，輻射強(qiáng)度為1.5～3KGy，之后以料液重量比1:12～1:25的比例，將南極磷蝦粉末溶于去離子水中，磁力攪拌15～35分鐘，最后進(jìn)行超聲處理，超聲條件為：300～500W，40～65℃，15～30分鐘，得到南極磷蝦溶液；

3)復(fù)合酶解：調(diào)節(jié)步驟2)得到的南極磷蝦溶液的pH至7.5～11.0，以2500～3500U/g南極磷蝦的比例加入彈性蛋白酶，在25～40℃的條件下水浴酶解20～45分鐘；冷卻至室溫后再次調(diào)節(jié)溶液的pH至7.5～9.5，以3000～4000U/g南極磷蝦的比例加入絲氨酸羧肽酶，在30～45℃的條件下水浴酶解30～40分鐘，最后在沸水浴中滅酶15～20分鐘后離心取上清液，即得到南極磷蝦酶解液；

4)過濾：依次用截留分子量為10000Da、7000Da的超濾膜對(duì)南極磷蝦酶解液進(jìn)行超濾，得到分子量小于7000Da的南極磷蝦多肽液；

5)干燥：用鹽酸將步驟4)得到的南極磷蝦多肽液pH調(diào)至2.7～3.2，過濾，收集過濾液，4℃靜置過夜；用油水分離型高速管式離心機(jī)除去油脂，收集重液相(水相)，用NaOH將水相調(diào)pH至5.8～7.2，過濾，收集濾出液，用水將羥基磷灰石調(diào)成糊狀，裝柱，裝柱后用酸性磷酸鹽緩沖液清洗，再用酸性磷酸鹽緩沖液平衡，將上述濾出液上羥基磷灰石層析柱進(jìn)行吸附，用酸性磷酸鹽緩沖液洗脫；收集目標(biāo)物，用濾膜進(jìn)行超濾至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％，即得南極磷蝦多肽濃縮液，將濃縮液冷凍結(jié)冰后進(jìn)行真空冷凍干燥，得到南極磷蝦多肽粉末。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)中輻射強(qiáng)度為1.5KGy，料液重量比為1:14，磁力攪拌時(shí)間為17分鐘，超聲處理?xiàng)l件為350W，50℃，20分鐘；步驟3)中先將步驟2)得到的南極磷蝦溶液pH調(diào)至8.5，彈性蛋白酶的比例為2900U/g南極磷蝦，水浴條件為28℃，25分鐘，冷卻后再次調(diào)節(jié)溶液pH至8.0，絲氨酸羧肽酶的比例為3000U/g南極磷蝦，水浴條件為37℃，35分鐘，滅酶時(shí)間為17分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)中輻射強(qiáng)度為2KGy，料液重量比為1:15，磁力攪拌時(shí)間為20分鐘，超聲處理?xiàng)l件為390W，45℃，20分鐘；步驟3)中先將步驟2)得到的南極磷蝦溶液pH調(diào)至8.5，彈性蛋白酶的比例為3000U/g南極磷蝦，水浴條件為30℃，25分鐘，冷卻后再次調(diào)節(jié)溶液pH至7.5，絲氨酸羧肽酶的比例為3500U/g南極磷蝦，水浴條件為35℃，36分鐘，滅酶時(shí)間為18分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)中輻射強(qiáng)度為2.5KGy，料液重量比為1:20，磁力攪拌時(shí)間為30分鐘，超聲處理?xiàng)l件為400W，55℃，30分鐘；步驟3)中先將步驟2)得到的南極磷蝦溶液pH調(diào)至11.0，彈性蛋白酶的比例為3500U/g南極磷蝦，水浴條件為37℃，30分鐘，冷卻后再次調(diào)節(jié)溶液pH至8.0，絲氨酸羧肽酶的比例為4000U/g南極磷蝦，水浴條件為40℃，35分鐘，滅酶時(shí)間為16分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血脂能力的南極磷蝦多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)中輻射強(qiáng)度為3KGy，料液重量比為1:25，磁力攪拌時(shí)間為27分鐘，超聲處理?xiàng)l件為440W，45℃，25分鐘；步驟3)中先將步驟2)得到的南極磷蝦溶液pH調(diào)至10.5，彈性蛋白酶的比例為3500U/g南極磷蝦，水浴條件為35℃，35分鐘，冷卻后再次調(diào)節(jié)溶液pH至9.0，絲氨酸羧肽酶的比例為3800U/g南極磷蝦，水浴條件為39℃，35分鐘，滅酶時(shí)間為20分鐘。