[發明專利]一種CUX1蛋白可結合DNA片段及在CUX1活性檢測中的應用

有效

• 申請號: 201710198121.5
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN107034215B
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 童強松;鄭麗端;李歡歡;楊楓;葉霖;陳亞俊;宋華杰;李聃
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/66;C12N15/85
• 代理公司: 42250 武漢泰山北斗專利代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 程千慧

1.一種CUX1蛋白可結合的DNA片段，其特征在于，包含多個CUX1蛋白結合框，每個所述CUX1蛋白結合框的序列獨立地為5’-ATCGAT-3’或5’-ATCAAT-3，每兩個相鄰的CUX1蛋白結合框之間具有間隔序列，并且每兩個相鄰的CUX1蛋白結合框之間的間隔序列各自獨立地為3-10bp長，所述DNA片段序列如SEQ ID NO:1所示。

2.權利要求1所述的DNA片段在檢測細胞內CUX1轉錄調控活性中的應用。

3.一種用于檢測細胞內CUX1轉錄調控活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：將包括權利要求1所述的DNA片段以及連接于所述DNA片段下游的報告基因表達框的報告基因系統導入所述細胞；

S2：通過檢測所述報告基因的表達來計算所述細胞內CUX1轉錄調控活性；

所述報告基因系統為雙熒光素酶報告基因系統，包括重組質粒和對照質粒，并且所述重組質粒帶有所述DNA片段以及連接在所述DNA片段下游的熒光素酶I的表達框，所述對照質粒帶有熒光素酶II的表達框，所示熒光素酶I與所述熒光素酶II不同。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組質粒通過將所述DNA片段插入至質粒pGL3-Basic的Kpn I與Hind III位點之間得到。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述對照質粒為phRL-TK。

6.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其特征在于，S1具體包括：

S11：將所述細胞培養至貼壁，并恢復形態；

S12：將所述重組質粒和對照質粒轉染至細胞中。

7.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其特征在于，S2具體包括：

S21：轉染后將細胞繼續培養24-36小時，洗滌細胞；

S22：分別檢測轉染后的細胞中的熒光素酶I和熒光素酶II的活性；

S23：將熒光素酶II活性歸一化熒光素酶I活性得到值作為衡量CUX1轉錄調控活性的指標。