[發明專利]一種Smad4蛋白可結合DNA片段及在Smad4活性檢測中的應用有效
| 申請號： | 201710197699.9 | 申請日： | 2017-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN106868007B | 公開（公告）日： | 2019-12-13 |
| 發明（設計）人： | 鄭麗端;童強松;肖文晶;王建群;洪梅;葉霖;李聃;宋華杰 | 申請（專利權）人： | 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/6897;C12N15/85 |
| 代理公司： | 42250 武漢泰山北斗專利代理事務所(特殊普通合伙) | 代理人： | 程千慧 |
| 地址： | 430022 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 smad4 蛋白 結合 dna 片段 活性 檢測 中的 應用 | ||
1.一種Smad4蛋白可結合的DNA片段，其特征在于，序列如SEQ ID NO:1所示。
2.權利要求1所述的DNA片段在檢測細胞內Smad4轉錄調控活性中的應用。
3.一種用于檢測細胞內Smad4轉錄調控活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：將包含權利要求1所述的DNA片段以及連接于所述DNA片段下游的報告基因表達框的報告基因系統導入所述細胞；
S2：通過檢測所述報告基因的表達來計算所述細胞內Smad4轉錄調控活性
所述報告基因系統為雙熒光素酶報告基因系統，包括重組質粒和對照質粒，并且所述重組質粒帶有所述DNA片段以及連接在所述DNA片段下游的熒光素酶I的表達框，所述對照質粒帶有熒光素酶II的表達框，所述熒光素酶I與所述熒光素酶II激發產生的熒光波長不同。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組質粒通過將所述DNA片段插入至質粒pGL3-Basic的Kpn I與Hind III位點之間得到。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述對照質粒為phRL-TK。
6.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其特征在于，S1具體包括：
S11：將所述細胞培養至貼壁，并恢復形態；
S12：將所述重組質粒和對照質粒轉染至細胞中。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，S2具體包括：
S21：轉染后將細胞繼續培養24-36小時，洗滌細胞；
S22：分別檢測轉染后的細胞中熒光素酶I和熒光素酶II的活性；
S23：將熒光素酶II活性歸一化熒光素酶I活性得到的值作為衡量Smad4轉錄調控活性的指標。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院，未經華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710197699.9/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
