[發明專利]一種纖連蛋白和功能細胞復合型微囊化移植體的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710190208.8
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN106963782A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 王斌;桑喜成;張世陽;許義輝;賈秀秀;楊敏祺
• 申請（專利權）人: 王斌
• 主分類號: A61K35/39
• 分類號: A61K35/39;A61K35/34;A61K35/44;A61K38/39;A61K47/34;A61K47/36;A61K9/50;A61P9/00;A61P3/10;C12N5/071;C12N5/077
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種纖連蛋白和功能細胞復合型微囊化移植體的制備方法及應用。

背景技術

隨著社會經濟的發展和人們生活方式的變化，越來越多的疾病影響著人類健康，其中心血管疾病、糖尿病的人群基數大、高發病率、高死亡率已經成為危害人類健康的全球性重大疾病。

心血管疾病（CVD）一直是全球發病率、死亡率居先的疾病。近期，世界衛生組織（WHO）最新數據顯示，心血管疾病已成為全球疾病死亡首因，2004年有1710萬人死于CVD，占全球死亡的29％，其中約720萬死于冠心病，570萬死于腦卒中。預計至2030年，全球約2360萬人將死于CVD，主要死因為心臟病和腦卒中。糖尿病同樣是危害人類健康的全球性疾病之一，發病率高達3-5%，由其引發的死亡率僅次于心血管疾病和腫瘤。世界衛生組織預測，至2030年，糖尿病將成為第七大致死病因。隨著糖尿病在各人口大國的患病率和死亡率逐漸上升，糖尿病的患病人數和死亡人數均呈全球增加趨勢。世界衛生組織全球糖尿病報告顯示：全球18歲以上人群中，1980年糖尿病患者為1.08億人，2014年增加至4.22億人，占全球總人口的8.5%。2012年糖尿病直接導致150萬人死亡。糖尿病嚴重影響社會經濟，全球用于應對糖尿病的年成本超過8270億美元；至2030年，預計全球經濟將因糖尿病損失高達1.7萬億美元。

我國是人口大國，每年因心血管疾病死亡人數達300萬。根據權威機構預測，到2030年，我國35-84歲的人群，心血管疾病的發病將增加50%，今后10年心血管病患病人數仍將快速增長。據世界衛生組織的數據顯示，中國目前糖尿病患者人數高達1.14億，全世界每3-4個糖尿病患者就有一位來自中國。2011年我國疾病控制中心統計結果表明：我國糖尿病發病率高達4%，其中Ⅰ型糖尿病為5%-10%。據統計，2006-2015年，中國因心血管疾病和糖尿病導致的GDP損失達5580億美元。

隨著生物技術的不斷發展，以細胞移植為技術手段來治療心血管疾病和糖尿病等重大疾病已成為國內外眾多學者的研究熱點。國內外眾多臨床應用研究證實，用具有特定功能的心肌細胞、平滑肌細胞、骨骼肌細胞及骨髓間充質干細胞移植于受損的心肌治療心血管疾病；用胰島細胞和胰島干細胞移植治療糖尿病具有顯著的治療效果，細胞移植是治療心血管疾病和糖尿病的根本方法之一，隨著再生醫學的不斷發展，細胞移植必將成為治療包括心血管疾病、糖尿病等眾多人類重大疾病的新型臨床治療手段之一。但是，當前利用細胞移植進行心血管疾病和糖尿病治療面臨著三大技術難題：一、高質量的活性功能細胞的短缺；二、異體或異種免疫排斥反應；三、移植功能細胞在受者體內存活周期短，遠期治療效果差。因此，攻克細胞移植領域的三大技術難題，研究開發出可以供臨床大量推廣的細胞移植技術和產品是未來利用細胞移植手段治療各種重大疾病研究的必然趨勢。

本發明將利用海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉（APA）微囊化免疫隔離技術將纖連蛋白（FN）和功能細胞共同包裹形成復合型微囊化移植體，既可以通過微囊化免疫隔離技術避免功能細胞移植過程中的異體或異種免疫排斥反應，又可以充分發揮FN對促進細胞增殖、生長、分化等細胞再生修復的生物學特性，利用FN無血清技術規模化制備高質量的活性功能細胞，并且可以利用復合型微囊化移植體中的FN保持移植后功能細胞在受者體內高數量和高活性，提高細胞移植對心血管疾病或糖尿病等疾病的遠期治療效果。目前在國內外未見同類技術或產品的報道與上市。

發明內容

本發明的目的正是基于上述現有技術狀況、通過建立一種纖連蛋白和功能細胞復合型微囊化移植體的制備方法，來解決當前細胞移植治療心血管疾病和糖尿病等重大疾病臨床應用中所面臨的高質量的活性功能細胞的短缺，異體或異種免疫排斥反應，移植后功能細胞在受者體內存活周期短、遠期治療效果差等三大技術難題，為細胞移植治療各種重大疾病提供一種新的技術手段和方法。

基于上述目的，本發明的制備方法包括以下工藝步驟：

（1）功能細胞供體的選擇：從人或SPF哺乳動物獲得功能細胞供體，即根據疾病的治療需求選擇成人或SPF（無特定病原體級）哺乳動物做為功能細胞供體；

（2）功能細胞的分離純化：在無菌條件下，獲得（通過解剖得出）供體內功能細胞所在的目標組織，針對不同功能細胞的特性利用機械分離法、膠原酶消化法、不連續密度梯度離心法等方法，從目標組織中分離純化出具有特定功能的組織功能細胞；