[發(fā)明專利]一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法及應(yīng)用

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• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN106938058A
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樊渝江;劉鈞;林海;王啟光;孫勇
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/24;A61L27/50;A61L27/52
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司51214
• 代理人: 錢成岑

1.一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，包括細胞-膠原混合液的制備，細胞-膠原凝膠微球的制備以及脫細胞膠原凝膠微球支架的制備。

2.如權(quán)利要求1所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述細胞-膠原混合液的制備為：將膠原溶液pH調(diào)節(jié)至6.5～7.5，并將細胞懸液均勻混合到膠原溶液中即得細胞-膠原混合液；所述細胞-膠原凝膠微球的制備為：將細胞-膠原混合液加入到油相溶液中，生成穩(wěn)定懸浮液后，提供合適的成膠條件使微球凝膠化，然后經(jīng)離心或過濾收集、清洗后即得細胞-膠原凝膠微球。

3.如權(quán)利要求1所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述脫細胞膠原凝膠微球支架的制備為：將上述制備的細胞-膠原凝膠微球在體外培養(yǎng)后收集所需的膠原凝膠微球，在液氮及水中反復(fù)冷凍-溶解1～10次，經(jīng)清洗Ⅰ、震蕩Ⅰ后將膠原凝膠微球加入到DNAse1的水溶液中震蕩1～24h，最后經(jīng)清洗Ⅱ、戊二醛處理及培養(yǎng)基清洗即得脫細胞膠原凝膠微球支架。

4.如權(quán)利要求3所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述戊二醛處理后還包括酒精浸泡及超聲處理，最后再用培養(yǎng)基清洗。

5.如權(quán)利要求3所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述液氮及水中反復(fù)冷凍-溶解前還包括用加有蛋白酶抑制劑的去離子水將凝膠微球清洗1～6次。

6.如權(quán)利要求3所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述水的溫度為25～37℃；所述清洗Ⅰ為用0.1％～2％的Triton X-100水溶液中清洗1～3次；所述震蕩Ⅰ為在100～1000rpm轉(zhuǎn)速下震蕩1～60min。

7.如權(quán)利要求3所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述DNAse1的水溶液中DNAse1的濃度為10～500units/mL；所述DNAse1的水溶液中震蕩溫度為20～37℃，轉(zhuǎn)速為10～140rpm，并間隔0.5～12h更換一次新鮮DNAse1溶液，每次更換DNAse1溶液前用0.05％～2％的Triton X-100水溶液清洗0～5min。

8.如權(quán)利要求3或4所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的制備方法，其特征在于，所述清洗Ⅱ為采用EDTA溶液清洗0～10次；所述戊二醛處理為采用0.1％戊二醛處理0～24小時；所述酒精浸泡為采用用75％酒精浸泡0～1小時；所述超聲處理時間為0～10min。

9.一種脫細胞膠原凝膠微球支架，其特征在于，所述膠原凝膠微球支架采用權(quán)利要求1至8所述的制備方法制備得到。

10.如權(quán)利要求9所述一種脫細胞膠原凝膠微球支架的應(yīng)用，其特征在于，所述脫細胞膠原凝膠微球支架在軟骨及軟骨下骨缺損修復(fù)中的應(yīng)用。