[發明專利]一種快速檢測褐飛虱對苯基吡唑類殺蟲劑抗藥性的方法有效
| 申請號： | 201710186158.6 | 申請日： | 2017-03-21 |
| 公開（公告）號： | CN107475360B | 公開（公告）日： | 2021-04-16 |
| 發明（設計）人： | 劉澤文;張懿熙;劉美玲 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6844 | 分類號： | C12Q1/6844;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孫斌 |
| 地址： | 21009*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 檢測 褐飛虱 苯基 吡唑 殺蟲劑 抗藥性 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于環介導恒溫擴增技術LAMP的褐飛虱對苯基吡唑類殺蟲劑抗藥性快速分子檢測方法，其特征在于如下步驟實現：
（1）提取單頭褐飛虱2-3齡若蟲基因組DNA；
（2）LAMP反應體系 2.5 μL 10×Isothermal Amplification Buffer，8 U Bst 2.0DNA polymerase，1 μL單頭褐飛虱基因組DNA，終濃度0.25 mmol/L的dNTPs、1 mmol/L的MgSO4、0.2 μmol/L的外引物、1.2 μmol/L內引物、0.6 mol/L的betaine、 羥基萘酚藍HNB，加雙蒸水至反應總體積為25 μL；其中所述的外引物F3：GTGACACGTGCAGGAAACT；B3：GGCGTTGGTGGATGACATG；內引物 FIP：AGCCCCGACGGAATGTAGATCT-GCGTGCGAGATCCAGTTC；BIP：TATCGTGGGTCTCGTTCTGGCT-GTGGTGACGCCGAGTGAC；
（3）LAMP反應程序 64℃ 60-70 min；
（4）結果判定 反應結束后，反應液為天藍色，說明樣品為抗性個體；反應液仍為紫色，說明樣品為敏感個體；
所述內引物、外引物根據Seq No.1設計得到。
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