[發明專利]一種檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的引物及其應用

在審

• 申請號: 201710186149.7
• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN106834518A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 任緒義;羅英;張鋒;周韻
• 申請（專利權）人: 杭州迪安醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 丁靜靜,肖明芳

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種TaqMan-MGB探針法同時檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的方法和應用。

背景技術

酒精代謝相關基因是分子進化和群體遺傳學研究的熱點之一。酒精化學名乙醇，飲酒后乙醇經腸胃吸收進入血液。進入體內的乙醇90％--95％通過肝臟進行代謝，其余隨尿液、汗液和呼吸排出。乙醇在肝臟內主要需經過兩步代謝反應：從乙醇氧化為乙醛；從乙醛再氧化為乙酸。這兩步代謝反應都是在酶的催化下進行的，前者的酶叫乙醇脫氫酶(ADH)，后者的酶叫乙醛脫氫酶(ALDH)。基因科學家的研究表明，乙醇脫氫酶主要由ADH1B基因編碼，乙醛脫氫酶主要由ALDH2基因編碼。這兩種酶的突變可影響酒精代謝進而引起乙醛等有害物質的堆積，影響身體健康。而乙醛毒性很強，是第一類致癌原。慢代謝的人飲酒后體內乙醛會迅速累積，進而引發臉紅、心跳加速、惡心嘔吐和頭痛等不適反應。研究表明，乙醛慢代謝的人若長期飲酒，消化道癌癥如食道癌和肝癌的發病率會顯著上升。因此通過檢測ADH1B、ALDH2兩種基因，能夠幫助大家更具體地了解自己的酒精代謝能力，更具體地了解飲酒的健康風險，提前做好預防；同時基因檢測還能夠更科學更精確地幫助酒精中毒病人確定發病原因；還能夠在某些時候幫助實現用藥安全，以免在治療疾病的同時再造成其他疾病的發生。

一直以來，硝酸甘油作為首選的一線用藥，在臨床上被廣泛地用作抗心絞痛的治療，但該藥的臨床療效常因人而異。研究顯示，中國漢族人群中，硝酸甘油含服無效的比例高達25％以上，而ALDH2基因多態性與部分國人含服硝酸甘油治療心絞痛無效相關。研究表明乙醛脫氫酶是硝酸甘油在人體內生物代謝的關鍵酶，ALDH2基因多態性會導致乙醛脫氫酶活性顯著降低，從而影響硝酸甘油治療心絞痛的療效。因此，檢測ALDH2基因型，可以為醫生臨床使用硝酸甘油提供參考，減少用藥無效導致的意外死亡。

檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性對硝酸甘油的臨床用藥及指導人們健康飲酒具有重要的意義。目前已有很多種檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的方法，如測序法、毛細管電泳法、基因芯片法等，但其用于檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性存在操作復雜、易污染、成本高等特點，因此需要建立一種檢測特異性和靈敏度高、準確性和精密度好、操作簡單、快速、無污染、成本低廉，且可實現多個位點同時檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種同時檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的檢測引物探針，以克服現有技術檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性操作復雜、易污染、成本高等問題。

本發明還要解決的技術問題是提供一種檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的方法。

TaqMan-MGB探針法檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的引物，包括如下引物和探針：

用于擴增ADH1B基因rs1229984多態性位點的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

用于擴增ALDH2基因rs671多態性位點的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

檢測ADH1B基因rs1229984位點多態性的TaqMan-MGB探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；

檢測ALDH2基因rs671位點多態性的TaqMan-MGB探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；

其中SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7在5’末端標記Fam信號，SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8在5’末端標記VIC信號；

其中，引物SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和探針SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6在同一管中共同使用；引物SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和探針SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8在同一管中共同使用。

上述TaqMan-MGB探針法檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的引物在檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性中的應用。

一種TaqMan-MGB探針法檢測ADH1B基因和ALDH2基因多態性的試劑盒，包括權利要求1所述的引物和探針以及如下試劑：2x PCR反應混合液、陽性標準品。

其中，所述2x PCR反應混合液的配方如下：PCR反應緩沖液、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺和dNTPs。