[發明專利]重組ΔfHbp-NadA融合蛋白載體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710183433.9
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN107151270B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 吳克
• 申請（專利權）人: 武漢博沃生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/095;A61K47/64;A61P31/04
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 熊嫻;馮子玲

本發明提供了一種重組ΔfHbp?NadA融合蛋白載體及其制備方法，并進一步的提供了基于ΔfHbp?NadA蛋白載體的多價腦膜炎球菌和肺炎球菌綴合疫苗。通過設計軟性連接肽鏈將兩個活性蛋白融合表達，再保持各自的活性的同時讓兩者成為單一的蛋白質，因而在工業生產及免疫接種是更具有可控性，風險大大降低，又能提供更多的多糖?蛋白結合位點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別是涉及一種用于多價腦膜炎球菌和肺炎球菌綴合疫苗的重組ΔfHbp-NadA蛋白載體及其制備方法和應用。

背景技術

一、病原微生物與疫苗

能引起人體或動物體發生傳染病的微生物，稱為病原微生物或致病微生物。傳染是指病原微生物侵入機體后，在一定的部位生長、繁殖，并引起一系列病理生理的過程。當病原微生物侵入機體后，病原微生物與機體互相作用，互相改變對方的活性與功能，因此能否引起傳染病，一方面取決于病原微生物的致病能力即致病性或毒力，另方面還取決于機體的抵抗力即免疫力。病原性細菌引起傳染的能力大小，就是細菌的毒力或致病性。細菌毒力的有無和毒力的強弱主要取決于它的侵襲力、產毒素性和引起超敏反應的能力。

細菌產生的毒素可分為外毒素和內毒素兩大類。外毒素是病原菌在生長繁殖期間分泌到周圍環境種的一種代謝產物，主要由革蘭氏陽性菌產生，少數革蘭氏陰性菌也能產生。其化學組成是蛋白質，抗原性強，毒性也強，但極不穩定，對熱和某些化學物質敏感，容易受到破壞。常見的如：白喉棒桿菌產生的白喉外毒素、破傷風梭菌產生的破傷風毒素、霍亂弧菌產生的腸毒素、肉毒梭菌產生的肉毒毒素等。大多數革蘭氏陰性細菌能產生內毒素，實際上它存在于細菌細胞壁的外層，屬于細胞壁的組成部分，一般情況下并不分泌到環境中，只有當細菌溶解后才釋放出來，因而稱為內毒素，其毒性比外毒素要低，抗原性也弱。

同種生物的不同個體，當它們與病原菌接觸后，有的患病，有的則安然無恙，原因在于不同個體的免疫力不同。免疫就是指機體識別和排除抗原異物(如病原微生物等)的一種保護性反應。一般來講，它對機體是有利的，在異常條件下，也可能損害機體。人體的免疫分為非特異性免疫和特異性免疫。其中特異性免疫是指機體針對某一種或某一類微生物或產物所產生的特異抵抗力。而疫苗即是科學家研制出來使機體產生特異性免疫抵抗病原微生物對人體侵害的生物制品，通常由病原微生物本身加以制備而成的。細菌、病毒和立克次氏體等病原微生物制成疫苗，注射機體后，使機體產生特異性或致敏性淋巴細胞，分泌抗體，達到特異性免疫效果。

而疫苗又分為治療性和預防性兩種，通過治療性疫苗治療疾病，并通過預防性疫苗保護人體不受致病性微生物的侵害。經過多年的努力，醫學界已經開發出各種不同的疫苗用以預防，諸如細菌、病毒和真菌等，感染造成的各種疾病，極大地提高了人類的健康水平。生物技術的不斷發展，促進了疫苗品種的多樣化。用以預防病毒導致的傳染病有滅活病毒技術開發出來的疫苗，如乙腦疫苗、脊髓灰質炎疫苗、流感疫苗等；減毒病毒技術開發出來的減毒活疫苗，如輪狀病毒疫苗、口服脊髓灰質炎病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、風疹病毒疫苗和水痘疫苗等。用以預防細菌性傳染病的有用蛋白和多糖等生物大分子純化技術開發出來的細菌類疫苗，如破傷風類毒素、白喉類毒素、百日咳類毒素及其亞細胞組分、流行性腦膜炎球菌多糖和23價肺炎球菌多糖等。更先進的有用半化學結合技術開發出來的預防腦膜炎和肺炎的細菌疫苗，如流行性嗜血桿菌b型多糖-蛋白綴合疫苗、7價或10價肺炎球菌多糖-蛋白綴合疫苗以及4價腦膜炎球菌多糖-蛋白綴合疫苗。通過對生物技術的不斷改進，能夠開發出更多的新型疫苗產品來應付不同的病原微生物對人類健康的挑戰。

二、多糖-蛋白綴合疫苗及其蛋白載體