[發明專利]一種提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑及其測定方法

有效

• 申請號: 201710182922.2
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106885778B
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 荀恒杰;陳旭;陳剛
• 申請（專利權）人: 依科賽生物科技(太倉)有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;G01N21/82
• 代理公司: 32267 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 馬廣旭

1.一種提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑，其特征在于：包括

沉淀試劑，所述沉淀試劑能夠將蛋白樣品溶液中的蛋白沉淀出來，且蛋白沒有損失，并可進一步去除位于上清中的化學試劑；所述沉淀試劑按質量組分計，包括以下組分：

三氯乙酸20-30份

氯化鈉25-35份

脫氧膽酸鈉0.01-0.05份

水100-150份；

堿性銅試劑，所述堿性銅試劑溶解沉淀的蛋白并與蛋白的肽鍵結合；所述堿性銅試劑按質量組分計，包括以下組分：

五水硫酸銅0.05-0.1份

酒石酸鈉鉀0.1-0.5份

氫氧化鈉2-10份

水200-300份；

生色試劑，未與蛋白結合的堿性銅試劑被還原后與所述生色試劑反應，產生特定范圍吸收波長，最佳吸收波長的吸收值與蛋白樣品溶液中的蛋白量成線性關系；：所述生色試劑按質量組分計，包括以下組分：

2，9-二甲基-1，10-菲啰啉鹽酸鹽0.1-0.8份

還原型谷胱甘肽3-10份

檸檬酸鈉50-90份

水200-400份；

所述的提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑的測試方法，將蛋白樣品溶液經過沉淀試劑沉淀，堿性銅試劑溶解蛋白沉淀并與被沉淀的蛋白相結合，未與蛋白質結合的堿性銅試劑被還原并與生色試劑反應，產生特定范圍的吸收波長，蛋白量與最佳吸收波長吸收值成線性關系；

具體包括以下步驟：

（1）將梯度稀釋的蛋白標準樣品和待測定的未知濃度蛋白樣品用沉淀試劑混合；

（2）離心沉淀蛋白，去除上清，吸干殘留液體，以去除位于上清中的化學試劑；

（3）堿性銅試劑溶解蛋白沉淀，并與蛋白的肽鍵相結合；

（4）未與蛋白結合的銅試劑在堿性條件被還原后與生色試劑下發生反應，并產生特定顏色的吸收波長；

（5）制作標準曲線，蛋白質量與最佳吸收波長吸收值成反比，根據標準曲線，確定待測蛋白樣品的蛋白濃度。

2.根據權利要求1所述的提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑，其特征在于：所述堿性銅試劑按質量組分計，包括以下組分：

五水硫酸銅0.0625份

酒石酸鈉鉀0.255份

氫氧化鈉6份

水250份。

3.根據權利要求1所述的提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑，其特征在于：所述生色試劑按質量組分計，包括以下組分：

2，9-二甲基-1，10-菲啰啉鹽酸鹽0.285份

還原型谷胱甘肽7份

檸檬酸鈉75份

水250份。

4.根據權利要求1所述的提高蛋白濃度測定準確性的快速測定試劑，其特征在于：所述蛋白標準樣品包括牛血清白蛋白。