[發(fā)明專利]蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710182227.6
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106834192A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉峰;王江偉;潘明;王傳磊;王珍偉;張魯新;王培;朱洪菊
• 申請（專利權(quán)）人: 山東五福生生態(tài)工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;A01N63/00;A01P5/00;A01P21/00;C12R1/085
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11371
• 代理人: 李進

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

蠟樣芽孢桿菌是芽胞桿菌屬中的一種。菌體細胞桿狀，末端方，成短或長鏈，1.0～1.2×3.0～5.0微米，產(chǎn)芽孢，芽孢圓形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊無明顯膨大，革蘭氏陽性，無莢膜，運動，菌落大，表面粗糙，扁平，不規(guī)則。蠟樣芽孢桿菌的菌落形態(tài)：在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，培養(yǎng)24h，可形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無色素、稍有光澤的白色菌落直徑5-7mm。蠟樣芽孢桿菌在M.S.P培養(yǎng)基上生長更旺盛，菌落直徑達8-10mm，質(zhì)地更軟，挑起來呈絲狀，培養(yǎng)時間稍長，菌落表面呈毛玻璃狀，并產(chǎn)生紅色色素。蠟樣芽孢桿菌在蛋白胨酵母膏平板上菌落為灰白色，不透明，表面較粗糙，似毛玻璃狀或融蠟狀，菌落較大。

有益蠟樣芽孢桿菌是我國農(nóng)業(yè)部正式批準生產(chǎn)生物制品的菌種，具有調(diào)節(jié)宿主微生態(tài)平衡的功能，廣泛應(yīng)用于飼料、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥保健和食品等各領(lǐng)域。

目前對于蠟樣芽孢桿菌的發(fā)酵方式主要為液體發(fā)酵，這種發(fā)酵方式普遍存在活菌數(shù)和芽孢率偏低的問題，沒有芽孢的菌體會在短時間內(nèi)死亡，大大降低菌劑的活性和質(zhì)量穩(wěn)定性。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法，該發(fā)酵方法采用高密度固體發(fā)酵培養(yǎng)蠟樣芽孢桿菌，能促進蠟樣芽孢桿菌的生長，提高蠟樣芽孢桿菌的活菌數(shù)量和芽孢產(chǎn)率。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種所述蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法得到的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵產(chǎn)物，該發(fā)酵產(chǎn)物中活菌數(shù)高、雜菌率低、芽孢率高，具有高效防治植物根結(jié)線蟲的功能。

本發(fā)明的目的之三在于提供一種所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵產(chǎn)物在制備農(nóng)業(yè)生物防治制劑和防治植物土傳病害中的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法，包括以下步驟：

將蠟樣芽孢桿菌菌株經(jīng)種子活化和液體種子培養(yǎng)后，采用固體培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；

所述固體培養(yǎng)基的組分包括：40～60重量份蘑菇渣、10～30重量份稻殼、15～35重量份麩皮和2～8重量份玉米漿，pH值為6.5～7.5。

優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，上述蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法包括以下步驟：

(a)斜面種子活化：將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度37±1℃，培養(yǎng)時間36～48h，得到斜面種子；

(b)液體種子培養(yǎng)：將步驟(a)得到的斜面種子接種于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37±1℃，培養(yǎng)時間36～48h，得到液體種子；

(c)固體發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(b)得到的液體種子接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37±1℃，培養(yǎng)時間48～72h，得到發(fā)酵產(chǎn)物；

(d)將步驟(c)得到的發(fā)酵產(chǎn)物干燥后，得到干燥的發(fā)酵產(chǎn)物。

進一步，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟(a)中營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化鈉和20g/L瓊脂，pH值為7.0～7.2。

進一步，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟(b)中液體培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化鈉，pH值為7.0～7.2。

進一步，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟(c)中液體種子的接種量為8～12％(v/w)。

進一步，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟(c)中固體培養(yǎng)基為淺盤濕固體培養(yǎng)基，所述淺盤濕固體培養(yǎng)基為將固體培養(yǎng)基的組分放入淺盤內(nèi)加水得到，淺盤濕固體培養(yǎng)基的水含量為55～65％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟(d)中干燥具體包括：將步驟(c)得到的發(fā)酵產(chǎn)物烘干至含水率小于20％。

優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基均獨立地在使用前進行滅菌處理，滅菌條件為121℃、0.11MPa滅菌20～60min。

優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，上述蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法，包括以下步驟：

(a)斜面種子活化：將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于經(jīng)121℃、0.11MPa滅菌20min的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時間36～48h，得到斜面種子；