[發明專利]蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法及其發酵產物和應用

在審

• 申請號: 201710182227.6
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106834192A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 劉峰;王江偉;潘明;王傳磊;王珍偉;張魯新;王培;朱洪菊
• 申請（專利權）人: 山東五福生生態工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;A01N63/00;A01P5/00;A01P21/00;C12R1/085
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李進

1.一種蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

將蠟樣芽孢桿菌菌株經種子活化和液體種子培養后，采用固體培養基進行發酵培養，得到發酵產物；

所述固體培養基的組分包括：40～60重量份蘑菇渣、10～30重量份稻殼、15～35重量份麩皮和2～8重量份玉米漿，pH值為6.5～7.5。

2.按照權利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)斜面種子活化：將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于營養瓊脂斜面培養基上，培養溫度37±1℃，培養時間36～48h，得到斜面種子；

(b)液體種子培養：將步驟(a)得到的斜面種子接種于液體培養基中，培養溫度37±1℃，培養時間36～48h，得到液體種子；

(c)固體發酵培養：將步驟(b)得到的液體種子接種于固體培養基中，培養溫度37±1℃，培養時間48～72h，得到發酵產物；

(d)將步驟(c)得到的發酵產物干燥后，得到干燥的發酵產物。

3.按照權利要求2所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，步驟(a)中營養瓊脂斜面培養基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化鈉和20g/L瓊脂，pH值為7.0～7.2；

優選地，步驟(b)中液體培養基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化鈉，pH值為7.0～7.2。

4.按照權利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，步驟(c)中液體種子的接種量為8～12％(v/w)。

5.按照權利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，步驟(c)中固體培養基為淺盤濕固體培養基，所述淺盤濕固體培養基為將固體培養基的組分放入淺盤內加水得到，淺盤濕固體培養基的水含量為55～65％。

6.按照權利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，步驟(d)中干燥具體包括：將步驟(c)得到的發酵產物烘干至含水率小于20％。

7.按照權利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，所述營養瓊脂斜面培養基、液體培養基和固體培養基均獨立地在使用前進行滅菌處理，滅菌條件為121℃、0.11MPa滅菌20～60min。

8.按照權利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)斜面種子活化：將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于經121℃、0.11MPa滅菌20min的營養瓊脂斜面培養基上，培養溫度37℃，培養時間36～48h，得到斜面種子；

所述營養瓊脂斜面培養基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化鈉和20g/L瓊脂，pH值為7.0～7.2；

(b)液體種子培養：挑取步驟(a)得到的斜面種子兩環接種于1000L液體發酵罐中的經121℃、0.11MPa滅菌30min的液體培養基中，培養溫度37℃，培養時間36～48h，得到液體種子；

所述液體培養基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化鈉，pH值為7.0～7.2；

(c)固體發酵培養：將經121℃、0.11MPa滅菌60min的固體培養基的組分放入淺盤內，加水得到淺盤濕固體培養基，淺盤濕固體培養基水含量60％；將步驟(b)得到的液體種子以10％(v/w)的接種量接種于淺盤濕固體培養基中，攪拌均勻，培養溫度37℃，培養時間48～72h，得到發酵產物；

所述固體培養基的組分包括：50重量份蘑菇渣、20重量份稻殼、25重量份麩皮和5重量份玉米漿，pH值為6.5～7.5；

(d)將步驟(c)得到的發酵產物置于50～80℃條件下烘干，期間取樣測定水分，當含水率低于20％時，烘干結束，得到干燥的發酵產物。

9.一種蠟樣芽孢桿菌固體發酵產物，其特征在于，按照權利要求1-8任一項所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵方法得到。

10.一種按照權利要求9所述的蠟樣芽孢桿菌固體發酵產物在制備農業生物防治制劑和防治植物土傳病害中的應用。