[發明專利]一種促甲狀腺激素檢測試紙及其制備方法

在審

• 申請號: 201710181739.0
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106841605A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 歐衛軍;孫一品;邵志燕;徐秋楠
• 申請（專利權）人: 南通伊仕生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司32243
• 代理人: 錢靚

1.一種促甲狀腺激素檢測試紙，其特征在于：包括塑料基片（1），所述塑料基片（1）上設有上樣墊（2）和吸水墊（3），所述上樣墊（2）和所述吸水墊（3）上均設有保護膜（4），所述上樣墊（2）和所述吸水墊（3）之間下方設有硝酸纖維素膜（5），所述上樣墊（2）的連接端設有固相化膠體金（6），所述固相化膠體金（6）的一端與所述硝酸纖維素膜（5）的一端搭接在一起，所述硝酸纖維素膜（5）上依次包被有檢測線（T）和質控線（C）。

2.一種促甲狀腺激素檢測試紙的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、硝酸纖維素膜的制備：

a、選擇3um～10um孔徑的硝酸纖維素膜，根據需要將膜分切成寬度為大于等于2.0cm,長度為30.5cm的規格備用；

b、用0.1M磷酸鹽緩沖液配制供檢測線包被使用的TSH-α單克隆抗體1.5 mg/ml及用質量百分含量0.85%的氯化鈉緩沖液配制供質控線包被使用的抗鼠IgG多克隆抗體1.5mg/ml；

c、選擇硝酸纖維素膜的抗體包被面并作標記，將需包被的檢測線和質控線平行均勻的包被在膜片上，且檢測線與質控線的間距控制在0.5cm，硝酸纖維素膜在4℃～35℃的恒溫條件下干燥備用；

d、配置封閉處理浸泡液，向配液罐加入實際生產量的純化水；用電子分析天平稱量0.1Mol緩沖液、質量百分含量0.5%糖份、質量百分含量1%封閉蛋白、質量百分含量0.05％防腐劑，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分攪拌均勻，攪拌時間不少于10分鐘，備用；

e、將包被膜放于處理槽中，加入配好的溫度大約在36℃0.01M的PBS緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01M的PBS緩沖液中5分鐘，并且膜不移動、不重疊，5分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01M的PBS緩沖液倒掉；再將第一次用0.01M的PBS緩沖液浸泡過5分鐘的膜放入處理槽中，加入配好的0.01M的PBS緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01M的PBS緩沖液中30分鐘，并且膜不移動、不重疊，30分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01M的PBS緩沖液倒掉；然后將用0.01M的PBS緩沖液浸泡過兩次的膜放于處理槽中，用配好的封閉處理浸泡液浸泡，確保每條膜完全浸沒在處理液中15分鐘，并且膜不移動、不重疊，15分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將每框的膜重新拉一邊，確保膜沒有已到框子外面和沒有膜重疊后，再將框子和膜放入處理液中繼續浸泡20分鐘，20分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將膜拉在紗布上晾稍干；

f、貼板干燥：撕去膠板雙面膠上切割線中間的白紙，用鑷子將膜正好放在膠板中央空白位置并使切角在右上方，且膠板右邊與膜右邊平齊，避免在生產過程中誤差，確保顯色位置相對準確，貼板時全部頂C線一頭貼，膜貼在膠板上后，隔著雙面膠紙抹平膜面，避免有氣泡；

控制室內的溫度18～28℃、相對濕度≤40％，并保證干燥間空氣能循環流通且除濕機風不會直接吹到膜面上，干燥時間≥4小時，后備用；

B、聚酯纖維條的標記及固相：

a、膠體金復溶液的配制：向配液罐加入實際生產量的純化水；用電子分析天平稱量質量百分含量5%海藻糖、質量百分含量2%牛血清白蛋白、質量百分含量0.5%檸檬酸三鈉、質量百分含量0.05%聚乙二醇、質量百分含量0.05％NaN₃，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分攪拌均勻，攪拌時間不少于30分鐘，備用；

b、用量筒量取需要標記量的膠體金，按pH7.0-7.3進行調節，即加入體積百分含量0.45% 0.2mol/L的碳酸鉀溶液，于磁力攪拌器上攪拌15分鐘后，取TSH-β單克隆抗體按10ug/ml標記膠體金體積體積百分含量5%的雙蒸水中稀釋并混合均勻，加入膠體金中，于磁力攪拌器上攪拌30分鐘后加入0.5‰穩定劑后攪拌30分鐘后離心，收集沉淀，用膠體金復溶液按3%復溶，于磁力攪拌器上攪拌至混合均勻，備用；

c、取上述b 體積百分含量3%復溶的膠體金，用膠體金復溶液按體積百分含量40%復溶，于磁力攪拌器上混合均勻，將混合均勻的膠體金溶液按照50μl/cm²的濃度澆于膠體金吸附墊上，置于干燥室晾干≥4個小時，干燥室控制溫度18-28℃，相對濕度≤40%，并保證空氣暢通且氣流不能直接吹于聚酯纖維條上，將干燥好的標記金放入到裝有干燥劑的鋁箔袋中，密封保存，備用；

C、組裝及裁切：

a、取已粘貼硝酸纖維素膜的透明基片半成品，將固相了的固相化膠體金按0.5cm寬度裁切成0.5cm×30cm的條狀后粘貼在透明基片上，并保持與硝酸纖維素膜呈搭接約1mm，將吸水紙復合在硝酸纖維素膜的透明基片膜上端并與膜搭接約1mm，將吸樣載體復合在固相了的膠體金下端并與其搭接約1mm，備用；

b、根據相應的反應裝置，將已組裝備用的基片，切割成條狀試紙，備用。