[發明專利]用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測的引物、探針及其使用方法

在審

• 申請號: 201710181549.9
• 申請日: 2017-03-24
• 公開（公告）號: CN106868168A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 韋信賢;童桂香;黎小正;黃國秋;陳靜;吳明媛;蘭柳春;楊姝麗
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區水產科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 楊立華

1.用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測的引物和探針，其特征在于包括分別針對水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因Sul1、Sul2和Sul3的三組引物和探針，所述三組引物和探針分別具有以下堿基序列：

2.根據權利要求1所述的用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測的引物和探針，其特征在于：所述探針Sul1-P、Sul2-P、Sul3-P的5’端分別標記有熒光報告基團FAM、HEX、CY5，3’端均標記有熒光淬滅基團BHQ1。

3.根據權利要求1所述的用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測的引物和探針，其特征在于所述三組引物和探針的摩爾比為Sul1-F∶Sul1-R∶Sul1-P∶Sul2-F∶Sul2-R∶Sul2-P∶Sul3-F∶Sul3-R∶Sul3-P＝6∶6∶3∶4∶4∶2∶4∶4∶2。

4.權利要求1所述用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測的引物和探針的使用方法，其特征在于在三重熒光定量PCR中擴增水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因Sul1、Sul2和Sul3。

5.根據權利要求4所述用于水產動物源細菌磺胺類藥物耐藥基因三重熒光定量PCR檢測引物和探針的使用方法，其特征在于所述三重熒光定量PCR的反應體系和反應程序為：反應體系為：Premix Ex Taq(2×)18μL，ROX Reference Dye II0.5μL，20μ mol/L Sul1上、下游引物(Sul1-F/Sul1-R)均為0.9μL，10μ mol/LSul1探針(Sul1-P)用量為0.9μL，20μ mol/LSul2和Sul3的上、下游引物(Sul2-F/Sul2-R、Sul3-F/Sul3-R)均為0.6μL，10μ mol/LSul2和Sul3探針(Sul2-P、Sul3-P)用量均為0.6μL，模板3μL，用滅菌ddH₂O補足至30μL；

反應條件為：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火并延伸45s，擴增40個循環；在每個循環60℃結束時收集熒光信號。