[發明專利]氟樂靈半抗原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710177395.6
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN106928079B
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 穆洪濤;李軒;陳雪貞;賀帆麗;劉鳳銀;袁學文
• 申請（專利權）人: 廣東第二師范學院
• 主分類號: C07C229/18
• 分類號: C07C229/18;C07C227/18;C07K16/44
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 鄧義華;廖苑濱

本發明公開了氟樂靈半抗原及其制備方法和應用，其具有如下結構式：其中，R為?(CH₂)_n?，n＝1?4或?CH＝CH?或本發明的六種半抗原均是在氨基位點上衍生連接手臂，具有活性羧基，與載體蛋白偶聯后能使機體產生效價高，能識別氟樂靈農藥共有結構的特異抗體。本發明的半抗原化合物，不僅合成方法簡便、純度較高，而且能應用于合成適于動物免疫的抗原體系，彌補了國內氟樂靈免疫學檢測方法技術領域的空白，為氟樂靈免疫檢測方法的進一步發展奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及免疫學技術領域，具體涉及氟樂靈半抗原及其制備方法和應用。

背景技術

氟樂靈(trifluralin)是一種重要的選擇性芽前二硝基苯胺類(dinitroaniline)除草劑，廣泛用于大豆、大麥、蔬菜及水果等作物，防除一年生禾本科雜草及部分闊葉雜草。氟樂靈雖屬低毒農藥，但長期暴露實驗表明會對肝臟和腎臟造成損傷，在高劑量暴露下會造成胎兒的體重和身高偏低并增加流產風險。因氟樂靈農藥的廣泛使用，使其在土壤和水體當中的殘留普遍存在，特別是能夠在水產品(魚、蝦、蟹)體內富集，從而對水產品的食用安全帶來巨大隱患。

為了避免氟樂靈除草劑的潛在危害，很多國家對其使用進行了限制。歐盟2015年對氟樂靈制定新的限量標準，水果、蔬菜、谷物及動物源食品中氟樂靈的最大殘留限量(MRLs)為0.01mg/kg。日本對進口水產品中氟樂靈最大殘留限量為0.001mg/kg。

目前農產品中氟樂靈的檢測通常使用儀器分析的方法，如紫外光譜、高效液相色譜及液質聯用、氣相色譜、毛細管電泳等。以上的分析方法具有準確、靈敏的特點，但由于儀器昂貴、運行成本高難以全面推廣。實踐證明，以快速檢測方法對大量樣品進行初篩，然后對其中陽性樣品進行儀器確證是提高檢測效率、降低成本的有效方式，符合我國國情。在現有快速檢測技術中，基于抗原-抗體特異性識別的免疫檢測技術由于具有靈敏、快速、準確、成本低廉且可實現現場檢測等優勢，被認為是21世紀最具競爭性和挑戰性的超微量檢測技術。

關于氟樂靈免疫檢測的文獻國外僅有數篇報道。Bruce Riggle于1991年第一嘗試構建了針對氟樂靈的酶聯免疫分析方法，線性范圍0.1～1.0ppm(ng/mL)，同時可以檢測部分氟樂靈的代謝物。Székács et al 2000年對氟樂靈免疫檢測進行了再次嘗試并建立了ELISA方法，檢測的線性的范圍有所提高(0.1～100ng/mL)，與其他結構類似物的交叉反應率≤5％，并檢測了地表水和果汁中的氟樂靈含量。Székács課題組于2003年又建立了基于免疫傳感器的光波介導的光譜檢測(optical waveguide lightmode spectroscopicdetection，OWLS)方法，雖然此方法大大提高了檢測靈敏度(2×10-7～3×10-5ng/mL)，但是此種方法因儀器條件問題難以在實際檢測中應用。目前，國內未見有關氟樂靈免疫檢測的相關報道。國內檢測市場上更是缺少氟樂靈農藥殘留免疫檢測試劑盒的產品。

現在大部分藥物、毒素、環境污染物分子質量比較小，屬于半抗原，大部分半抗原需要與蛋白質偶聯后才能產生免疫原性。目前制備半抗原抗體的常規方法是選擇具有毒理學意義的原形藥物作為待測物，通過設計合成保留待測物分子結構特征或類似結構特征并帶有活性基團的半抗原，通過半抗原與大分子蛋白質載體偶聯，制備人工免疫原，同時經動物免疫制備針對半抗原的特異性抗體。而半抗原的提供是免疫化學分析中最為關鍵的步驟，合理的半抗原設計和制備將有利于抗體的質量的提高。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一系列可通用于氟樂靈檢測的半抗原，所述半抗原偶連載體蛋白后能使機體產生效價高，能識別氟樂靈農藥共有結構的特異性抗體。

本發明的另一個目的是提供所述半抗原的制備方法和應用。

本發明所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現：

一種氟樂靈半抗原，其特征在于，具有如下結構式：