[發明專利]稀有基因突變的檢測

在審

• 申請號: 201710177160.7
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN108624662A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 陳漢奎;劉和錄;覃海德
• 申請（專利權）人: 陳漢奎
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京市正見永申律師事務所 11497
• 代理人: 閔丹;黃小臨

1.一種基因擴增方法，包括：

(1)第一輪擴增，采用上游正向引物和下游反向引物，對包括突變型位點的基因片段以及包括相應野生型位點的基因片段不加區別地進行擴增；

(2)第二輪擴增，采用同樣的正向引物和反向引物，以及特異性抑制野生型模板擴增的阻物，來特異性擴增突變型模板。

2.權利要求1所述的方法，其中的第二輪擴增包括兩個退火溫度，阻物退火溫度和引物退火溫度，且阻物退火溫度比引物退火溫度高。

3.權利要求1或2所述的方法，其中阻物在第二輪擴增開始前或開始之時加入至反應體系中。

4.權利要求1～3任一所述的方法，其中針對同一種突變的成對引物彼此濃度相同或基本相同。

5.權利要求1～4任一所述的方法，其中的第一輪和/或第二輪擴增為多重PCR，以2對或2對以上的正反向引物來擴增不同的突變位點。

6.權利要求5所述的方法，其中針對不同突變位點的引物在反應體系中的濃度彼此相同或基本相同。

7.用于基因擴增的引物和阻物的組合，其特征在于，針對每一基因突變位點有正向引物、反向引物和阻物，其中：

正向引物對應于突變位點的上游序列，反向引物對應于突變位點的下游序列，兩種引物本身都不覆蓋突變位點；

阻物覆蓋突變位點且在突變位點處與野生型配對、與突變型不配對，阻物的3’-末端被封閉，阻物的5’-端與正向或反向引物的3’-端有重疊。

8.權利要求7所述的組合，其中阻物與野生型模板結合后的解鏈溫度(Tm-BW)比有重疊的引物的解鏈溫度(Tm-Po)高出2℃以上。

9.權利要求7或8所述的組合，其中所述Tm-BW比阻物與突變型模板結合后的解鏈溫度(Tm-BM)高出3℃以上。