[發明專利]一種鑒定烏蘇里擬鲿雌、雄個體的微衛星標記與特異性引物及應用

有效

• 申請號: 201710174183.2
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106811540B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 朱傳坤;潘正軍;王輝;常國亮;丁懷宇;聶孝燕;余祥勝;吳楠
• 申請（專利權）人: 淮陰師范學院
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12N15/11
• 代理公司: 淮安市科文知識產權事務所 32223
• 代理人: 謝觀素

本發明屬于水產養殖中群體鑒定技術領域，公開了一種鑒定烏蘇里擬鲿雌、雄個體的微衛星標記與特異性引物及應用。提供1個烏蘇里擬鲿性別特異性微衛星位點，其核苷酸序列為SEQ ID NO：1?2中的任一個。本發明還提供從上述微衛星位點設計的引物，其核苷酸序列為SEQ ID NO：3?4。本發明從烏蘇里擬鲿微衛星富集文庫中篩選出1個微衛星位點，并根據微衛星兩端的側翼序列設計特異性引物，擴增結果具有性別特異性，能夠準確、有效地對烏蘇里擬鲿雌、雄個體進行鑒定，并可用來對自然水域和繁殖場群體的性別結構進行實時監測。本發明還公開了用于上述烏蘇里擬鲿雌、雄個體進行鑒定的試劑盒。本發明的鑒定方法具有準確度高、分辨率高和速度快的優勢。

技術領域

本發明屬于水產養殖中群體鑒定技術領域，具體的說是一種鑒定烏蘇里擬鲿性別的微衛星標記與特異性引物及其在烏蘇里擬鲿雌、雄個體鑒定中的應用。

背景技術

微衛星(Microsatellites) 又稱簡單序列重復(Simple Sequence Repeats，SSR)是指由1-6個核苷酸組成的簡單串聯重復DNA 序列。迄今研究過的所有生物種類中都發現了它的存在，并且分布密度很大。由于微衛星廣泛分布于基因組中，具有密度大、多態性豐富、高度雜合且穩定性好、遵循孟德爾分離定律共顯性遺傳、易于PCR 擴增等特點，已成為近年來最引人注目的新型DNA 標記，并廣泛應用于生物資源的家系譜系認證、基因連鎖分析、遺傳圖譜構建、種質鑒定、種群遺傳多樣性等許多研究領域。

烏蘇里擬鲿（Pseudobagras ussuriensis）為鯰形目、鲿科、擬鲿屬魚類，在我國黑龍江至珠江水系均有分布。因其具有肉質細嫩、味道鮮美、無肌間刺、營養價值高、食性廣、病害少、市場形象佳等優點，而倍受廣大消費者和養殖戶青睞。經過十多年的養殖試驗和推廣，目前烏蘇里擬鲿人工養殖已在全國多個省份開展。烏蘇里擬鲿具有明顯的性別生長差異，一般在一齡后這種差異更加明顯，表現為雄性生長速度和體型均明顯大于雌性。因此，全雄育種一直是研究者在該物種中進行育種研究的主要方向。

全雄育種中面臨的一個首要問題是如何快速、準確地鑒定目標個體的性別。雖然形態學方法可用于鑒別雌、雄個體，然而僅限于生理性別，對于激素處理后發生了性逆轉的個體的遺傳性別則無法鑒定。另外，雌、雄性形態特征在幼體階段很不明顯，難以通過形態進行性別鑒定。因此，需要建立一種快速、準確的方法，對烏蘇里擬鲿的雌、雄個體的遺傳性別進行有效鑒定。本團隊成員曾基于AFLP技術（Amplified Fragment LengthPolymorphism）開發出1個雄性特異性SCAR標記（Sequence Characterized AmplifiedRegions），并成功應用于烏蘇里擬鲿的性別鑒定 (Pan ZJ, Li XY, Zhou FJ, Qiang XG,Gui JF. Identification of Sex-Specific Markers Reveals Male Heterogametic SexDetermination in Pseudobagrus ussuriensis. Marine Biotechnology, 2015,17(4):441-451.）。然而，該方法仍存在不足之處，因為該標記是通過判斷某個個體在相應位點是否有擴增條帶來鑒定性別，如果某一個體在引物所在的側翼序列發生點突變，造成該個體中無擴增條帶，即出現了零等位基因（Null Allele），那么利用該標記對這類個體的性別判斷就可能出現錯誤。因此本發明開發了1個在烏蘇里擬鲿雌、雄間特異性微衛星標記，該標記可排除零等位基因造成的性別鑒定錯誤，可以更加精確地對烏蘇里擬鲿的性別進行鑒定。

發明內容

本發明的目的是提供一種鑒定烏蘇里擬鲿雌、雄性別的微衛星標記與特異性引物及其應用，即提供1個烏蘇里擬鲿性別特異性的微衛星標記以及相應的PCR引物，為鑒定烏蘇里擬鲿雌、雄個體提供有效的工具。

本發明的另一目的在于提供一種鑒定烏蘇里擬鲿雌、雄個體的方法。