[發(fā)明專(zhuān)利]一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的免疫層析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710173900.X
• 申請(qǐng)日: 2017-03-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106970217B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張勛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇美正生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/558
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

本發(fā)明公開(kāi)了一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的免疫層析方法，將有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥與乙酰膽堿酯酶結(jié)合的原理與免疫層析技術(shù)相結(jié)合，并制備抗電鰻乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體，并且該抗體結(jié)合電鰻乙酰膽堿酯酶的位點(diǎn)與有機(jī)磷結(jié)合電鰻乙酰膽堿酯酶的位點(diǎn)相同，以單克隆抗體固定檢測(cè)線，乙酰膽堿酯酶修飾指示劑，制備定量檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的免疫層析方法，實(shí)現(xiàn)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)線和質(zhì)控線的信號(hào)強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的定量檢測(cè)。本方法避免了有機(jī)磷農(nóng)藥指示劑的標(biāo)記和蛋白偶聯(lián)物的化學(xué)制備，簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序，降低了有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的使用對(duì)人體健康的危害和對(duì)環(huán)境的嚴(yán)重污染，本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高，可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、快速、現(xiàn)場(chǎng)高通量的檢測(cè)需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的免疫層析方法。

背景技術(shù)

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，農(nóng)藥的使用起到非常重要的作用，農(nóng)藥可以有效的防治病蟲(chóng)害，然而在提高農(nóng)副產(chǎn)品產(chǎn)量的同時(shí)，也造成了嚴(yán)重的食品和環(huán)境污染問(wèn)題，隨雨水進(jìn)入土壤的農(nóng)藥最后都會(huì)流入江河湖海中，不僅破壞了環(huán)境，也破壞了人類(lèi)的飲用水資源，而且農(nóng)殘會(huì)積累在水產(chǎn)品中，人類(lèi)長(zhǎng)期食用受農(nóng)藥污染的水產(chǎn)品會(huì)造成農(nóng)藥中毒，其中尤以有機(jī)磷農(nóng)藥為甚。

有機(jī)磷農(nóng)藥是指一類(lèi)含有三個(gè)磷脂鍵的有機(jī)酯類(lèi)化合物，大多呈油狀或結(jié)晶狀，除少數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥能溶于水外，一般不溶于水，易溶于苯、丙酮等有機(jī)溶劑，有機(jī)磷農(nóng)藥常用于防治植物的病蟲(chóng)害，具有種類(lèi)多、藥效高、見(jiàn)效快、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。除了少數(shù)的有機(jī)磷農(nóng)藥毒性較小以外，一般的農(nóng)藥都具有較大的毒性，很多品種對(duì)人畜的急性毒性很強(qiáng)，因此有機(jī)磷農(nóng)藥的快速、靈敏、精確、高通量的檢測(cè)方法非常必要。

傳統(tǒng)的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要是基于儀器的檢測(cè)方法，主要包括氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）、薄層色譜法（TLC）、毛細(xì)管電泳法（CE）等方法，然而這一類(lèi)方法所需儀器價(jià)格昂貴，樣品前處理復(fù)雜耗時(shí)，并且需要專(zhuān)業(yè)的操作人員進(jìn)行操作，因此限制了此類(lèi)方法的普遍使用，同時(shí)難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)高通量的檢測(cè)需求。基于抗原抗體的免疫檢測(cè)方法主要是利用抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別與結(jié)合，具有靈敏度高、特異性好等特點(diǎn)，并且免疫層析法還能實(shí)現(xiàn)快速、現(xiàn)場(chǎng)高通量檢測(cè)。然而這類(lèi)方法需要依賴(lài)高靈敏高特異性的抗體，而且一種抗體只能單一識(shí)別一種抗原或一類(lèi)有共同抗原決定簇的抗原。而有機(jī)磷農(nóng)藥的種類(lèi)繁多，要想實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)只能制備針對(duì)單一農(nóng)藥的抗體，大大增加了檢測(cè)成本。

從20世紀(jì)80年代起，基于有機(jī)磷農(nóng)藥抑制膽堿酯酶活性原理而建立的“酶抑制法”開(kāi)始被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的快速篩查，由于其簡(jiǎn)便快速的特性而迅速得到廣泛的應(yīng)用。將有機(jī)磷農(nóng)藥和膽堿酯酶結(jié)合的原理與免疫層析試紙條檢測(cè)方法相結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)。

中國(guó)專(zhuān)利201610215012.5和201610054574.6描述了利用膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)合的原理檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的免疫層析方法。專(zhuān)利201610054574.6中檢測(cè)線上包被有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥蛋白偶聯(lián)物，這種方法需要有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥蛋白偶聯(lián)物的合成；專(zhuān)利201610054574.6中將有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥蛋白偶聯(lián)物或有機(jī)磷農(nóng)藥與指示劑偶聯(lián)，也需要有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥蛋白偶聯(lián)物的合成操作，同時(shí)還需要有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥蛋白偶聯(lián)物或有機(jī)磷農(nóng)藥與指示劑的標(biāo)記步驟，因此這兩篇專(zhuān)利均使用了化學(xué)合成手段，然而化學(xué)合成反應(yīng)步驟繁瑣、副產(chǎn)物多、分離提純復(fù)雜且得率低，并且合成過(guò)程中需要使用有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品毒性較強(qiáng)，極易危害人體健康，同時(shí)對(duì)環(huán)境也會(huì)造成嚴(yán)重的污染。

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