[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710173900.X
• 申請(qǐng)日: 2017-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN106970217B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張勛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇美正生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1）以電鰻乙酰膽堿酯酶作為免疫原免疫小鼠，制備抗電鰻乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體，并且該單克隆抗體結(jié)合電鰻乙酰膽堿酯酶的位點(diǎn)與有機(jī)磷類農(nóng)藥結(jié)合電鰻乙酰膽堿酯酶的位點(diǎn)相同；

步驟2）用化學(xué)交聯(lián)法或物理吸附法將電鰻乙酰膽堿酯酶和質(zhì)控分子分別偶聯(lián)到指示劑表面，構(gòu)成電鰻乙酰膽堿酯酶標(biāo)記的指示劑和質(zhì)控分子標(biāo)記的指示劑，并將兩者混合得到標(biāo)記液；

步驟3）以底板、樣品墊、結(jié)合墊、層析膜、吸水墊和外殼構(gòu)建成免疫層析試紙條，其中結(jié)合墊上固定有步驟 2）制備的標(biāo)記液，層析膜上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線上固定有步驟1）制備的抗電鰻乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體，質(zhì)控線上固定有能與所述的質(zhì)控分子特異性結(jié)合的生物分子，所述層析膜、底板和外殼均沒有熒光特性；

步驟4）將檢測(cè)液滴加于試紙條的樣品墊處，進(jìn)行免疫層析，當(dāng)檢測(cè)液流經(jīng)檢測(cè)線和質(zhì)控線后，檢測(cè)線和質(zhì)控線的位置將會(huì)出現(xiàn)指示信號(hào)，根據(jù)檢測(cè)線和質(zhì)控線的信號(hào)強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的定量檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的指示劑為熒光染料或納米顆粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的納米顆粒為膠體金、量子點(diǎn)、磁納米顆粒、時(shí)間分辨熒光微球、彩色乳膠微球、熒光乳膠微球或上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的膠體金通過物理吸附法與電鰻乙酰膽堿酯酶和質(zhì)控分子偶聯(lián)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的量子點(diǎn)、磁納米顆粒、時(shí)間分辨熒光微球、彩色乳膠微球、熒光乳膠微球或上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒表面修飾有羧基或者氨基基團(tuán)，并通過化學(xué)交聯(lián)法與電鰻乙酰膽堿酯酶和質(zhì)控分子偶聯(lián)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的化學(xué)交聯(lián)法包括碳二亞胺法、戊二醛法、混合酸酐法或3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯法的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的有機(jī)磷農(nóng)藥為對(duì)硫磷、殺撲磷、氧化樂果、甲拌磷、甲胺磷、敵敵畏、甲基對(duì)硫磷、倍硫磷、敵百蟲、毒死蜱、殺螟硫磷、三唑磷、甲基毒死蜱、辛硫磷、喹硫磷。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量檢測(cè)有機(jī)磷類農(nóng)藥的免疫層析方法，其特征在于，所述的質(zhì)控分子為抗體，質(zhì)控線上的標(biāo)記物為與質(zhì)控分子特異性識(shí)別與結(jié)合的小分子偶聯(lián)物、大分子蛋白質(zhì)或二抗的一種，或質(zhì)控分子為鏈霉親和素，質(zhì)控線上的標(biāo)記物為生物素蛋白偶聯(lián)物。

9.一種如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的免疫層析方法制備的免疫層析試紙條，其特征在于，由依次在帶有粘合劑的底板上相互搭接的樣品墊、結(jié)合墊、層析膜、吸水墊組成，還包括放置試紙條的外殼，將試紙條裁切成預(yù)定的尺寸，裝入外殼中，完成檢測(cè)卡的裝配；

所述的結(jié)合墊上固定了電鰻乙酰膽堿酯酶和質(zhì)控分子標(biāo)記的指示劑，在層析膜上設(shè)有所述的抗電鰻乙酰膽堿酯酶的單克隆抗體噴涂的檢測(cè)線，和與質(zhì)控分子特異性結(jié)合的生物分子噴涂的質(zhì)控線；

所述的結(jié)合墊為玻璃纖維素膜或聚酯纖維素膜，所述的層析膜為硝酸纖維素膜或尼龍膜。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫層析試紙條在檢測(cè)食品中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用。