[發明專利]一株減毒高產鼠李糖脂的工程菌株及其構建與應用

在審

• 申請號: 201710172680.9
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN106754609A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 張友明;尹佳;符軍;姜嬋娟
• 申請（專利權）人: 山東大學蘇州研究院;山東大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/78;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 李健康

1.一種減毒高產鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌，其特征在于：所述工程菌是其基因組中已敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)且含有過表達質粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa)，命名為PAO1aroA；其中，所述過表達質粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.權利要求1所述減毒高產鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的構建方法，步驟是：

利用假單胞菌噬菌體的重組酶構建的同源重組系統，將一段50bp-100bp的攜帶短同源臂的抗性基因DNA片段整合到銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa)的染色體上，實現敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)，獲得減毒銅綠假單胞菌，再構建包含鼠李糖脂合成的轉運酯酶基因EstA和鼠李糖基轉移酶復合物基因RhlAB，慶大霉素抗性基因，接合轉移起始位點oriT和一個廣譜型復制子pBBRI的過表達質粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta，并將該過表達質粒轉入獲得的減毒銅綠假單胞菌中，即得到通過多拷貝質粒增加該菌鼠李糖脂合成相關基因的拷貝數實現的減毒高產鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌。

3.一種用于構建減毒高產鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的重組酶表達質粒，其特征在于：所述質粒是過表達質粒pBBRI-rha-redgam-BAS-kan，該質粒包含鼠李糖脂合成的轉運酯酶基因EstA和鼠李糖基轉移酶復合物基因RhlAB，慶大霉素抗性基因，接合轉移起始位點oriT和一個廣譜型復制子pBBRI，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述質粒不需要抗生素的選擇壓力，能在構建的減毒的銅綠假單胞菌中穩定復制。

4.權利要求1所述減毒高產鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌在工業化生產鼠李糖脂中的應用。