[發(fā)明專利]一株減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的工程菌株及其構(gòu)建與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710172680.9
• 申請(qǐng)日: 2017-03-21
• 公開（公告）號(hào): CN106754609A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張友明;尹佳;符軍;姜嬋娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)蘇州研究院;山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/78;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 李健康

1.一種減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌，其特征在于：所述工程菌是其基因組中已敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)且含有過表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa)，命名為PAO1aroA；其中，所述過表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.權(quán)利要求1所述減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的構(gòu)建方法，步驟是：

利用假單胞菌噬菌體的重組酶構(gòu)建的同源重組系統(tǒng)，將一段50bp-100bp的攜帶短同源臂的抗性基因DNA片段整合到銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa)的染色體上，實(shí)現(xiàn)敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)，獲得減毒銅綠假單胞菌，再構(gòu)建包含鼠李糖脂合成的轉(zhuǎn)運(yùn)酯酶基因EstA和鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物基因RhlAB，慶大霉素抗性基因，接合轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)oriT和一個(gè)廣譜型復(fù)制子pBBRI的過表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta，并將該過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入獲得的減毒銅綠假單胞菌中，即得到通過多拷貝質(zhì)粒增加該菌鼠李糖脂合成相關(guān)基因的拷貝數(shù)實(shí)現(xiàn)的減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌。

3.一種用于構(gòu)建減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的重組酶表達(dá)質(zhì)粒，其特征在于：所述質(zhì)粒是過表達(dá)質(zhì)粒pBBRI-rha-redgam-BAS-kan，該質(zhì)粒包含鼠李糖脂合成的轉(zhuǎn)運(yùn)酯酶基因EstA和鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物基因RhlAB，慶大霉素抗性基因，接合轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)oriT和一個(gè)廣譜型復(fù)制子pBBRI，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述質(zhì)粒不需要抗生素的選擇壓力，能在構(gòu)建的減毒的銅綠假單胞菌中穩(wěn)定復(fù)制。

4.權(quán)利要求1所述減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌在工業(yè)化生產(chǎn)鼠李糖脂中的應(yīng)用。