[發明專利]一種甘草子葉誘導組織培養方法

在審

• 申請號: 201710171923.7
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106888975A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 陳志育
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 談杰

技術領域

本發明屬于甘草組織培養技術領域，尤其涉及一種甘草子葉誘導組織培養方法。

背景技術

甘草，（學名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發芽率極低，野生資源不適應規模化和標準化生產的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對甘草的保護性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發芽率不高和人們對其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養對研究和生產具有重要作用。

稀土元素是17種特殊的元素的統稱，它的得名是因為瑞典科學家在提取稀土元素時應用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱，稀土是從18世紀末開始陸續發現，當時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態分離出來的，當時比較稀少，因而得名為稀土（Rare Earth，簡稱RE或R），然而經過大量的科學研究，在組織培養當中添加了稀土元素會大大地提高組織培養的質量。

鈰是周期系第ΙΙΙ族副族鑭系元素，一種稀土元素。原子序數58。穩定同位素：136、138、140、142。灰色金屬，有展性。密度：正方晶體6.9，立方晶體6.7。熔點799℃，沸點3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬，粉末在空氣中易自燃，易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%，是稀土元素中豐度最高的。

發明內容

基于現有技術中甘草的需求量巨大但供給品質參差不齊，且現有培養基的誘導效率低的問題，本發明提供一種甘草子葉誘導組織培養方法，其以MS培養基為基礎培養基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖，在后期誘導培養中添加增強顏色光源，極大地提高了甘草子葉的誘導率，本發明具有誘導率高低的優點。

一種甘草子葉誘導組織培養方法，其包括以下步驟：

步驟S10，按以下配方配制培養基：以MS培養基為基礎培養基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3 mg/L、活性炭的濃度為0.1 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；

步驟S20，選擇品質優良、健康的甘草無菌苗作為母本，用手術刀將無菌子葉切出，備用；

步驟S30，使用鑷子將子葉以傷口向下的豎直方向插入培養基中，將裝有子葉的組培瓶密封取出，并轉移到組培室中；

步驟S40，將組培室中的環境溫度調整為25℃～30℃，黑暗培養一周，一周后調整光源為2000～2500Lxs，光照時間為光照12小時/黑暗12小時；

步驟S50，在接種后一周添加80%紅色增強光源和20%藍色增強光源。

優選地，所述的步驟S10中還包括步驟S11，對培養基進行121℃的高溫蒸汽滅菌20分鐘。

優選地，所述的步驟S50中的增強光源是LED燈，紅色增強光源是紅色LED燈，藍色增強光源藍色LED燈。

優選地，所述的步驟S50中的紅色光源是波段為650nm-670nm的紅光，藍色光源是波段為450nm-470nm的藍光。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的描述。

一種甘草子葉誘導組織培養方法，其包括以下步驟：

步驟S10，按以下配方配制培養基：以MS培養基為基礎培養基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3 mg/L、活性炭的濃度為0.1 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L；