[發明專利]基質金屬蛋白酶?3測定試劑及其制備方法

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• 申請號: 201710171773.X
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106950382A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 吳朝暉
• 申請（專利權）人: 蘇州普瑞斯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/532
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技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種可采用膠乳增強免疫比濁法測定人血清中基質金屬蛋白酶-3含量的基質金屬蛋白酶-3測定試劑及其制備方法。

背景技術

MMP-3是基質金屬蛋白酶超家族的成員之一。基質金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca²⁺、Zn²⁺等金屬離子作為輔助因子而得名。其家族成員具有相似的結構，一般由5個功能不同的結構域組成:(1)疏水信號肽序列；(2)前肽區，主要作用是保持酶原的穩定，當該區域被外源性酶切斷后，MMPs酶原被激活；(3)催化活性區，有鋅離子結合位點，對酶催化作用的發揮至關重要；(4)富含脯氨酸的鉸鏈區；(5)羧基末端區，與酶的底物特異性有關。其中催化活性區和前肽區具有高度保守性。

MMP-3是一類能夠降解細胞外基質的蛋白酶，存在于正常人體，參與軟骨基質的降解，骨吸收，于細胞外基其中，金屬蛋白酶3不僅可以直接降解Ⅱ，IX，XI型膠原，還可以調節其他的MMPs活性。

MMP-3能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型膠原及明膠，其活性受到三個水平的調節，即基因轉錄水平，無活性酶前體經蛋白水解作用而激活以及特異性抑制因子(TIMP)的作用。

MMP-3可以將基質分子核心蛋白聚糖剪切，然后釋放具有生物學活性的轉化生長因子－β(TGF－β)，TGF－β不僅調控細胞的增值，且對血管生成也有作用。因此MMP-3與乳腺癌的發生、發展關系密切，而且在乳腺癌的浸潤、轉移過程中起重要作用。MMP-3能夠降解聚集的軟骨連結蛋白纖維結合素、核心蛋白及Ⅳ、Ⅶ、Ⅸ型的膠原的顯著活性，能導致軟骨的降解。強直性脊柱炎患者血清MMP-3水平顯著高于正常人群，能有效反映出患者的疾病活動及骨關節破壞程度，能為臨床判斷as病情進展及療效提供科學依據。

MMP-3是一種相對穩定的蛋白質，在-20℃下標本可以長期保存。目前有層析定性和酶免定量的檢測方法可用，層析定性僅能在樣本濃度超過檢測限后簡單確定有無，無法準確定量，不能反映病情的輕重程度及對病情進行及早的發現和治療，而且存在較大的假陰或假陽，酶免方法主要是被科學研究者應用于科研，由于各自進行檢測試劑的制備，沒有統一的配方及工藝，沒有對檢測條件深入研究，導致不同批次試劑檢測結果差異較大。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基質金屬蛋白酶-3測定試劑及其制備方法。

為實現上述發明目的之一，本發明采用如下技術方案：

一種基質金屬蛋白酶-3測定試劑，包括預處理試劑、抗體膠乳試劑、校準試劑；

所述預處理試劑包括緩沖劑、防腐劑、增敏劑、無機鹽、表面活性劑，所述預處理試劑的PH值為7.2-7.6；

所述抗體膠乳試劑包括緩沖劑、結合有抗人基質金屬蛋白酶-3抗體的膠乳微球、防腐劑、保護劑，所述膠乳微球直徑為100-400nm；

所述校準試劑包括定量的基質金屬蛋白酶-3抗原。

作為本發明進一步改進的技術方案，所述預處理試劑中的無機鹽包括氯化鈉、氯化鉀，緩沖劑為磷酸鹽、三羥甲基氨基甲烷、甘氨酸、4-羥乙基哌嗪乙磺酸中的一種，增敏劑為聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、氟化鈉中的一種。

作為本發明進一步改進的技術方案，所述抗體膠乳試劑中與膠乳微球結合的抗人基質金屬蛋白酶-3抗體為鼠抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體、羊抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體、兔抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體中至少一種，或者是鼠抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體、羊抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體、兔抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體中至少一種。

作為本發明進一步改進的技術方案，所述抗體膠乳試劑中的保護劑為牛血清白蛋白、酪蛋白、季銨鹽、還原型谷胱甘肽中的一種或多種。

為實現上述另一發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，分別制備預處理試劑、抗體膠乳試劑、校準試劑；

所述預處理試劑的制備方法包括以下步驟：將緩沖劑、防腐劑、增敏劑、無機鹽、表面活性劑與水混合調配為PH值為7.2-7.6的溶液即得；

所述抗體膠乳試劑的制備方法依次包括以下步驟：

S1、將直徑為100-400nm的膠乳微球在含碳化二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的緩沖溶液中活化，緩沖液pH值為6.1；