[發明專利]基質金屬蛋白酶?3測定試劑及其制備方法

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• 申請號: 201710171773.X
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106950382A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 吳朝暉
• 申請（專利權）人: 蘇州普瑞斯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基質金屬蛋白酶-3測定試劑，其特征在于，包括預處理試劑、抗體膠乳試劑、校準試劑；

所述預處理試劑包括緩沖劑、防腐劑、增敏劑、無機鹽、表面活性劑，所述預處理試劑的PH值為7.2-7.6；

所述抗體膠乳試劑包括緩沖劑、結合有抗人基質金屬蛋白酶-3抗體的膠乳微球、防腐劑、保護劑，所述膠乳微球直徑為100-400nm；

所述校準試劑包括定量的基質金屬蛋白酶-3抗原。

2.根據權利要求1所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑，其特征在于，所述預處理試劑中的無機鹽包括氯化鈉、氯化鉀，緩沖劑為磷酸鹽、三羥甲基氨基甲烷、甘氨酸、4-羥乙基哌嗪乙磺酸中的一種，增敏劑為聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、氟化鈉中的一種。

3.根據權利要求1所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑，其特征在于，所述抗體膠乳試劑中與膠乳微球結合的抗人基質金屬蛋白酶-3抗體為鼠抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體、羊抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體、兔抗人基質金屬蛋白酶-3單克隆抗體中至少一種，或者是鼠抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體、羊抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體、兔抗人基質金屬蛋白酶-3多克隆抗體中至少一種。

4.根據權利要求1所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑，其特征在于，所述抗體膠乳試劑中的保護劑為牛血清白蛋白、酪蛋白、季銨鹽、還原型谷胱甘肽中的一種或多種。

5.一種基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，分別制備預處理試劑、抗體膠乳試劑、校準試劑；

所述預處理試劑的制備方法包括以下步驟：將緩沖劑、防腐劑、增敏劑、無機鹽、表面活性劑與水混合調配為PH值為7.2-7.6的溶液即得；

所述抗體膠乳試劑的制備方法依次包括以下步驟：

S1、將直徑為100-400nm的膠乳微球在含碳化二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的緩沖溶液中活化，緩沖液pH值為6.1；

S2、離心或切向流過濾去掉步驟S1中制得反應液中的除活化膠乳微球外的組分，加pH7.0-7.4的緩沖液用超聲重懸分散膠乳微球，加入抗人基質金屬蛋白酶-3抗體，在25攝氏度持續、輕微混合1小時；

S3、離心或切向流過濾去掉步驟S2中制得反應液中的除結合有抗人基質金屬蛋白酶-3抗體的膠乳微球外的組分，加pH7.5-8.0的含牛血清白蛋白或酪蛋白的緩沖液用超聲重懸分散膠乳微球，在25攝氏度持續、輕微混合1小時；

S4、離心或切向流過濾去掉步驟S3中制得反應液中的除膠乳微球外的組分，加pH7.5-8.0的含保護劑、防腐劑的緩沖液用超聲重懸分散膠乳微球即得；

所述校準試劑的制備方法包括以下步驟：使用稀釋液將基質金屬蛋白酶-3抗原稀釋到所需濃度即得。

6.根據權利要求5所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，所述抗體膠乳試劑的制備步驟S1中的膠乳微球為羧基聚苯乙烯膠乳微球。

7.根據權利要求5所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，所述抗體膠乳試劑的制備步驟S1中的緩沖液為2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖液，且濃度在20-50mmol/L之間。

8.根據權利要求5所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，所述抗體膠乳試劑的制備步驟S1中的膠乳微球為單一的粒徑，或由不同粒徑大小的膠乳微球混合而成。

9.根據權利要求5所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，所述抗體膠乳試劑的制備步驟S1中的碳化二亞胺為1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。

10.根據權利要求5所述的基質金屬蛋白酶-3測定試劑的制備方法，其特征在于，所述抗體膠乳試劑的制備步驟S4中的保護劑為牛血清白蛋白、酪蛋白、季銨鹽、還原型谷胱甘肽中的一種或多種。