[發(fā)明專利]生物樣本血液中苯系物的測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710169700.7
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號(hào): CN106950303B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦小江;侯曉敏;聶繼盛;張坤;張紅梅
• 申請（專利權(quán)）人: 山西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 14111 太原倍智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 駱洋

本發(fā)明為一種生物樣本血液中苯系物的測定方法，即通過吹掃捕集/氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測定血液中6種苯系物含量的方法。本發(fā)明對(duì)吹掃捕集實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，使血液中的6種苯系物富集和解析，然后用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用和以同位素內(nèi)標(biāo)法選擇特征離子進(jìn)行定性和定量分析。本發(fā)明方法操作簡便、分析周期短、分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測試的要求，適合用于生物樣本血液中苯系物的同時(shí)檢測分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種生物樣本血液中苯系物的測定方法。

背景技術(shù)

苯系物是化工、醫(yī)藥、農(nóng)藥、制革等行業(yè)的重要原料和溶劑。由于苯系物具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，在環(huán)境中廣泛存在，因其接觸途徑廣，已成為一種重要的職業(yè)危害因素。由于苯系物對(duì)人體健康的危害極大，如對(duì)造血系統(tǒng)造成損傷及致畸致癌。因此如何對(duì)苯系物內(nèi)暴露含量進(jìn)行有效的測定是當(dāng)前環(huán)境醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和亟待解決的問題。

目前，對(duì)于空氣中、水中苯系物的檢測方法已有很多，而且各方法已被公眾所熟知，與水、空氣等相比，血液成分及理化性質(zhì)非常復(fù)雜，用于檢測水和空氣中苯系物的方法并不適用于對(duì)血液的檢測。目前未見有關(guān)于生物樣本血液中苯系物的檢測技術(shù)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種生物樣本血液中苯系物的測定方法，至少達(dá)到分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測試的要求。

針對(duì)以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的生物樣本血液中苯系物的測定方法，采用吹掃捕集/氣相色譜/同位素內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜聯(lián)用法測定血液中苯系物的含量，該測定方法具體包括如下步驟：

混標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的純物質(zhì)，用甲醇配制混標(biāo)溶液；

同位素內(nèi)標(biāo)溶液的配制：稱取苯系物的同位素物質(zhì)，用甲醇配制同位素內(nèi)標(biāo)溶液；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制：取混標(biāo)溶液，用甲醇配成具有5級(jí)以上濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；分別取各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液加入到對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣瓶中，并在每個(gè)進(jìn)樣瓶中依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液、空白血液和消泡劑，最后用純水定容；

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的檢測及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將各級(jí)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液通過吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)、以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制各物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

血樣的測定：取血樣加入進(jìn)樣瓶中，依次加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液和消泡劑，最后用純水定容，然后通過吹掃捕集儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，得到血樣中苯系物和同位素內(nèi)標(biāo)溶液中苯系物的峰面積之比，將峰面積之比分別代入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到血樣中苯系物的含量。

本發(fā)明采用P&T/GC/MS聯(lián)用技術(shù)同位素內(nèi)標(biāo)法，對(duì)生物樣本血液中苯系物含量進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析，為人體苯系物內(nèi)暴露檢測方法提供科學(xué)依據(jù)，檢測結(jié)果分離度好，準(zhǔn)確度和精密度能滿足分析測試的要求。本發(fā)明使用到了同位素內(nèi)標(biāo)法。現(xiàn)有技術(shù)中定量方法多用外標(biāo)法或歸一化法，但是歸一化法需要知道各組分的校正因子，不適于微量雜質(zhì)的含量測定；外標(biāo)法要求對(duì)照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近，且該方法的準(zhǔn)確性受進(jìn)樣重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性的影響。內(nèi)標(biāo)法即選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加入待測樣品溶液中，以待測組分和內(nèi)標(biāo)的峰面積做比值，測定待測組分含量的方法。內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)：在色譜柱不超載的范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)樣量重復(fù)性無關(guān)；只要被測物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物出峰，且能完全分離就可定量，與其他組分無關(guān)；能避免實(shí)驗(yàn)各步處理操作中的待測組分丟失造成的定量不準(zhǔn)確。內(nèi)標(biāo)法缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物不易得。內(nèi)標(biāo)物的要求：內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會(huì)使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物的峰面積；內(nèi)標(biāo)物與待測化合物有相同或相似的理化性質(zhì)，它們的保留時(shí)間應(yīng)相近，但彼此能完全分離(分離度≥1.5)；內(nèi)標(biāo)物要求與樣本成分不干擾、不反應(yīng)；內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。本發(fā)明用同位素取代物作為內(nèi)標(biāo)，即用同位素取代待測化合物的C或H，使內(nèi)標(biāo)物質(zhì)與待測化合物既有相似的理化性質(zhì)又彼此能完全分離。同位素內(nèi)標(biāo)與待測化合物的保留時(shí)間和離子豐度等色譜行為類似。