[發(fā)明專利]鮮螺旋藻中藻藍(lán)蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的提取工藝

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710169066.7
• 申請(qǐng)日: 2017-03-21
• 公開（公告）號(hào): CN108623675A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳云飛;李志良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇海睿生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/795
• 分類號(hào): C07K14/795;C07K1/14;C07D487/22;C08B37/00
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本發(fā)明公開了鮮螺旋藻中藻藍(lán)蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的提取工藝，它涉及螺旋藻中活性物質(zhì)的提取工藝技術(shù)領(lǐng)域。將新鮮螺旋藻稱重，然后離心洗滌1?3次，稱重藻泥，加0.5?4倍的藻泥重量的水，攪拌均勻，凍融兩次，在零下20℃下冷凍過夜，在室溫中溶解，第二次溶解后，再加入藻泥2?8倍重量的水，放置2?8h后，離心，得上清液a和固體b，固體b經(jīng)乙醇索式提取方式提取后得到提取液和固體c，其中上清液a用于藻藍(lán)蛋白的提取；固體b的提取液用于葉綠素鋅鈉鹽的提取；固體c用于螺旋藻多糖的提取；此工藝較為簡單，能充分有效的利用現(xiàn)有的螺旋藻資源，實(shí)現(xiàn)了對(duì)螺旋藻的綜合利用和深度開發(fā)，對(duì)螺旋藻產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有積極的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鮮螺旋藻中藻藍(lán)蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的提取工藝，屬于螺旋藻中活性物質(zhì)的提取工藝技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

螺旋藻是藍(lán)藻門，藍(lán)藻綱，斷增藻目，顫藻科中的螺旋藻屬低等水生植物。螺旋藻不僅具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，而且含有大量的對(duì)人體有益的生理活性物質(zhì)，在食品、醫(yī)藥和生物工程領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。螺旋藻中含有豐富的蛋白質(zhì)、葉綠素、多糖、β-胡蘿卜素以及γ-亞麻酸、脂肪等生物活性物質(zhì)。螺旋藻的主要成分是蛋白質(zhì)，占干重的60% -70%，且包含人體所需的8種氨基酸及多種生物活性物質(zhì)，具有特殊的醫(yī)療保健作用。葉綠素的含量也很高，能達(dá)到1.5g/100g。

由于螺旋藻所含以上多種生物活性物質(zhì)可作為新型的藥食兩用資源，現(xiàn)己成為當(dāng)前微藻研究的焦點(diǎn)之一。現(xiàn)在對(duì)螺旋藻的利用基本上是以原藻干粉或其他劑型的形式進(jìn)入市場，技術(shù)含量低，尤其是對(duì)其生物活性成分的開發(fā)利用不足。雖有部分螺旋藻活性物質(zhì)提取的報(bào)道，在其在提取和加工的時(shí)候，往往只是單一的針對(duì)某一種活性物質(zhì)，不能兼顧多種生物活性物質(zhì)的利用，從而不能充分有效的利用現(xiàn)有的螺旋藻資源，造成資源的浪費(fèi)。因此，進(jìn)行螺旋藻的綜合利用和深度開發(fā)，實(shí)現(xiàn)螺旋藻中多種活性成分的綜合開發(fā)，對(duì)螺旋藻產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有積極的意義。

針對(duì)上述現(xiàn)狀，本發(fā)明提供了一種鮮螺旋藻中藻藍(lán)蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的綜合提取工藝。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種制備方法簡單, 能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)螺旋藻中多種活性成分進(jìn)行綜合開發(fā)利用的提取工藝。

本發(fā)明的鮮螺旋藻中藻藍(lán)蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的綜合提取工藝包括以下步驟：步驟一、綜合提取前處理，將新鮮螺旋藻稱重，然后離心洗滌1-3次，稱重藻泥，加0.5-4倍的藻泥重量的水，攪拌均勻，凍融兩次，在零下20℃下冷凍過夜，在室溫中溶解，第二次溶解后，再加入藻泥2-8倍重量的水，放置2-8h后，離心，得上清液a和固體b，固體b經(jīng)乙醇索式提取方式提取后得到提取液和固體c，其中上清液a用于藻藍(lán)蛋白的提取；固體b的提取液用于葉綠素鋅鈉鹽的提取；固體c用于螺旋藻多糖的提取；

步驟二、藻藍(lán)蛋白的提取，在上清液a中，用4-6mol/L的鹽酸調(diào)pH到4.0-4.5之間，攪拌半小時(shí)后進(jìn)行離心，離心條件為在4000rpm下離心15min，將上清液經(jīng)6k濾膜超濾一次，再加4倍體積蒸餾水超濾一次，調(diào)節(jié)pH7.0后冷凍干燥即得藻藍(lán)蛋白粉末；步驟三、葉綠素鋅鈉鹽的提取，將固體b經(jīng)乙醇索式提取方式提取6-12h，乙醇索式提取方式具體步驟為在90％的乙醇中，加入過量硫酸鋅，鹽酸調(diào)pH2-3即可，接著用10％NaOH溶液調(diào)pH7-8，過濾除去不溶性雜質(zhì)，將濾液繼續(xù)調(diào)pH11-12，維持pH11-12，在 60℃下攪拌皂化1-2h，用石油醚萃取至醚層顯淡黃色，濃縮皂化液至1/3體積，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值2-3，有沉淀析出，過濾，濾餅依次用水，石油醚洗滌各兩次后，用丙酮溶解濾餅，再用10％的NaOH乙醇溶液調(diào)pH11-12，過濾，烘干，即得葉綠素鋅鈉鹽；

步驟四、螺旋藻多糖的提取，在固體c中加入藻泥干重10倍量水，在0.5-5%中性蛋白酶，pH=7.0，35-45℃條件下攪拌提取2-5h，離心條件為在4000rpm下離心處理15min，將離心所得的上清液減壓濃縮至1/6體積，加入2-5倍量95％乙醇，在4℃下放置4-12h，過濾后，濾餅用無水乙醇洗1-3次，烘干，即得螺旋藻多糖。