[發明專利]快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條及其制作方法

在審

• 申請號: 201710157928.4
• 申請日: 2017-03-16
• 公開（公告）號: CN107102144A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 鄭志;于洪波
• 申請（專利權）人: 深圳市梓健生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市瑞方達知識產權事務所(普通合伙)44314
• 代理人: 張秋紅,張約宗

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種病毒的熒光定量免疫層析試紙條及其制作方法，尤其涉及一種快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條及其制作方法。

背景技術

寨卡病毒(Zika Virμs)屬于黃病毒科(Flaviviridae)、黃病毒屬(Flavivirμs genμs)，是一種主要由伊蚊傳播的蟲媒病毒。該病毒于1947年在烏干達首次發現，此后多年持續發現散在病例或發生小規模疫情。但自2015年以來，由寨卡病毒引起的人類感染不斷發生，美洲、西太平洋、非洲及亞洲已累計有32個國家和地區報告寨卡病毒在本地傳播。

目前，寨卡病毒主要是通過熒光PCR法，通過對血液和尿液進行病毒核酸的檢測。該方法檢測成本較高，耗時較長且對檢測人員有一定的資質要求，很難應用于大規模人群快速篩查和既往感染史的調查研究，因此，能否快速精準的檢測該病毒是控制疫情的關鍵因素。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于，針對現有技術的上述缺陷，提供一種快速、特異、精準檢測的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，可實現現場快速定量檢測。

本發明進一步要解決的技術問題是提供一種工藝簡單、易操作的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條的制作方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，包括底板，所述底板上依次設有樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，且所述樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙依次搭接；

所述結合墊上含有熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體和熒光微球標記的羊抗雞抗體；

所述包被膜包含檢測區和質控區，所述檢測區包被有與結合墊上的熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體具有不同表位的寨卡NS1蛋白單克隆抗體，所述質控區包被有雞IgY抗體。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述結合墊包被有終濃度為0.1-1.5mg/mL的熒光微球標記的寨卡NS1單克隆抗體、終濃度為0.5-1.5mg/mL的熒光微球標記的羊抗雞抗體，所述熒光微球標記的寨卡NS1單克隆抗體固化后在結合墊上的含量為0.6-1.2μg/cm²；所述熒光微球標記的羊抗雞抗體固化后在結合墊上的含量為0.4-0.6μg/cm²。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述樣品墊通過濃度為0.5～1.5mg/ml的鼠IgG包被。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述包被膜上檢測區包被有終濃度為0.5-2.0mg/ml、用量為25μl/27-29cm的寨卡NS1蛋白單克隆抗體。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述包被膜上質控區包被有終濃度為0.5-2.0mg/ml、用量為25μl/27-29cm的雞IgY抗體。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述熒光微球的粒徑為0.2-0.8μm，且熒光微球的激發光和發射光波長都為400～750nm。

所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條中，優選所述樣品墊為玻璃纖維材料，經Tris鹽溶液浸泡處理后熱烘干處理后裁切制成；所述包被膜為硝酸纖維素膜；所述結合墊為奧斯龍8964玻纖材料，并通過含有5％糖和2％吐溫的Tris溶液浸泡后烘干處理并裁剪而成。

一種快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條的制作方法，包括以下步驟：

A、.熒光微球的清洗與活化：將熒光微球水洗離心處理后，加入嗎啉乙磺酸溶液進行超聲處理；接著依次加入碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液，室溫混勻后離心處理，棄上清液，再用嗎啉乙磺酸溶液重懸，重復清洗一次后超聲混勻得到熒光微球懸液備用；

B、熒光微球標記抗體的制備：向步驟A活化后得到的熒光微球懸液中，分別逐滴加入寨卡NS1蛋白單克隆抗體或羊抗雞抗體，混勻室溫反應，離心清洗，沉淀用含有5％BSA的PBS溶液重懸后室溫反應，離心清洗，沉淀再用含1％BSA的TBST溶液重懸，超聲混勻，得到熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體懸液或熒光微球標記的羊抗雞抗體；

C、熒光標記抗體結合墊的制備：將步驟B得到兩種熒光微球標記抗體混合并使用含15％糖的TBST溶液稀釋，噴涂在結合墊上，烘干備用；