[發明專利]快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條及其制作方法

在審

• 申請號: 201710157928.4
• 申請日: 2017-03-16
• 公開（公告）號: CN107102144A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 鄭志;于洪波
• 申請（專利權）人: 深圳市梓健生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市瑞方達知識產權事務所(普通合伙)44314
• 代理人: 張秋紅,張約宗

1.一種快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，包括底板，所述底板上依次設有樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，且所述樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙依次搭接；

所述結合墊上含有熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體和熒光微球標記的羊抗雞抗體；

所述包被膜包含檢測區和質控區，所述檢測區包被有與結合墊上的熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體具有不同表位的寨卡NS1蛋白單克隆抗體，所述質控區包被有雞IgY抗體。

2.根據權利要求1所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述結合墊包被有終濃度為0.1-1.5mg/mL的熒光微球標記的寨卡NS1單克隆抗體、終濃度為0.5-1.5mg/mL的熒光微球標記的羊抗雞抗體，所述熒光微球標記的寨卡NS1單克隆抗體固化后在結合墊上的含量為0.6-1.2μg/cm²；所述熒光微球標記的羊抗雞抗體固化后在結合墊上的含量為0.4-0.6μg/cm²。

3.根據權利要求1所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述樣品墊通過濃度為0.5～1.5mg/ml的鼠IgG包被。

4.根據權利要求1所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述包被膜上檢測區包被有終濃度為0.5-2.0mg/ml、用量為25μl/27-29cm的寨卡NS1蛋白單克隆抗體。

5.根據權利要求1所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述包被膜上質控區包被有終濃度為0.5-2.0mg/ml、用量為25μl/27-29cm的雞IgY抗體。

6.根據權利要求1所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球的粒徑為0.2-0.8μm，且熒光微球的激發光和發射光波長都為400～750nm。

7.一種快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條的制作方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、熒光微球的清洗與活化：將熒光微球懸液離心處理后，加入嗎啉乙磺酸溶液進行超聲處理；接著依次加入碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液，室溫混勻后離心處理，棄上清液，再用嗎啉乙磺酸溶液重懸，重復清洗一次后超聲混勻備用；

B、熒光微球標記抗體的制備：在步驟A活化后得到的熒光微球懸液中，分別逐滴加入寨卡NS1蛋白單克隆抗體或羊抗雞抗體，混勻后室溫反應，離心清洗，沉淀用含有5％BSA的PBS溶液重懸后室溫反應，離心清洗，沉淀再用含1％BSA的TBST溶液超聲重懸，得到熒光微球標記的寨卡NS1蛋白單克隆抗體或熒光微球標記的羊抗雞抗體；

C、熒光標記抗體結合墊的制備：使用含15％糖的TBST溶液稀釋步驟B得到的兩種熒光微球標記抗體，噴涂在結合墊上，烘干備用；

D、包被膜的制備：分別將另一種寨卡NS1蛋白單克隆抗體和雞IgY抗體用PBS溶液調節濃度，然后將二者分別在檢測區和質控區間隔劃膜，烘干備用；

E、樣品墊的制備：將制作樣品墊的材料裁切成條狀，用含5％糖、2％吐溫的Tris溶液浸泡，浸泡充分后烘干，烘干后上面噴涂鼠IgG；

F、紙條的組裝：在底板上順次粘貼樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙之間互相搭接，然后切割成試紙條。

8.根據權利要求7所述的快速檢測寨卡病毒NS1蛋白的熒光定量免疫層析試紙條的制作方法，其特征在于，所述步驟A的熒光微球的清洗與活化步驟為：將熒光微球清洗，離心處理后，加入50mM pH為5.0～6.5的嗎啉乙磺酸溶液進行超聲處理，使得微球懸液濃度為10mg/ml；再依次加入濃度為50～100mg/ml的碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液，室溫混勻后離心處理，棄上清液，用20～50mM pH5.0～6.5的嗎啉乙磺酸溶液重懸，重復清洗一次后超聲復容得到熒光微球懸液備用。