[發明專利]一種利用嗜熱引發酶擴增DNA的方法有效
| 申請號： | 201710153877.8 | 申請日： | 2017-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN108624640B | 公開（公告）日： | 2021-09-21 |
| 發明（設計）人： | 付鈺;趙德 | 申請（專利權）人： | 中國科學院微生物研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12P19/34;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100101 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 引發 擴增 dna 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用嗜熱引發酶擴增長片段DNA的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)在反應體系中加入嗜熱引發酶，高溫狀態下使雙鏈DNA分子變性，所述嗜熱引發酶A為TtDnaG2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述高溫狀態是指95℃，30s；
(2)降低溫度至70℃保持30s，再升溫至95℃，保持3min，
(3)然后降溫至0℃靜置后，加入DNA聚合酶，所述DNA聚合酶為BST3.0；
(4)65℃溫度下延伸3小時，可實現DNA的擴增；
步驟(1)所述反應體系，其50μL反應體系中，樣品模板2.5pg～5ng，50mM pH7.5的HEPES，10mM DTT，100mM谷氨酸鉀，5mM乙酸鎂，100μM NTP,500μM dNTP,1μM嗜熱引發酶A。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)降溫靜置是指降溫至0℃靜置1min以上。
3.權利要求1-2任一所述的方法在全基因組測序中的應用。
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