[發明專利]一種多肽類熒光探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710152658.8
• 申請日: 2017-03-15
• 公開（公告）號: CN106929009B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 卿光焱;陸琦
• 申請（專利權）人: 武漢理工大學
• 主分類號: C07K5/06
• 分類號: C07K5/06;C07K5/113;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 鄔麗明

1.一種多肽類熒光探針，其特征在于，所述多肽類熒光探針的結構式如下：

所述多肽類熒光探針是通過多肽的氨基與異硫氰酸熒光素的異硫氰酸基鍵合所得，所述多肽為四肽DAPD或者二肽，所述二肽為PD、DP、DA、DD、PA或AD。

2.如權利要求1所述的多肽類熒光探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：在反應容器中加入異硫氰酸熒光素，然后用甲醇或者水溶解，加入多肽，使異硫氰酸熒光素與多肽的摩爾比為1.2-1.5:1；恒溫20-40℃條件下，攪拌反應4-25h后，旋轉蒸發除去溶劑得粗產物；粗產物經高效液相色譜分離、純化和干燥后得到所需純產物。

3.如權利要求1所述的多肽類熒光探針在識別唾液酸非疾病診斷和治療中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)先配置濃度為2.0-20μM的DAPD熒光探針水溶液，在激發波長470nm條件下測其發射的熒光光譜，記錄其500-550nm處的熒光強度I₀；

2)往該溶液中加入單糖并混合均勻，所述單糖與所述DAPD熒光探針的摩爾比為0.1-10，在激發波長470nm條件下測其發射的熒光光譜，記錄其在500-550nm處的熒光強度I₁；

3)往步驟2)所得的溶液中繼續加入單糖并混合均勻，在激發波長470nm條件下測其發射的熒光光譜，記錄其在500-550nm處的熒光強度I₂；

4)重復步驟3)n遍，分別得到熒光強度I₃,…I_n；

5)以熒光強度I₂,…I_n分別對應的單糖的摩爾數與DAPD熒光探針的摩爾數之比為橫坐標，以I₂,…I_n為縱坐標，得到熒光響應性曲線，若該曲線呈下降趨勢，則說明單糖溶液中含有唾液酸。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述步驟1)中的DAPD熒光探針水溶液中加入Tris-HCl緩沖液調節pH＝5-9。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述步驟2)中的單糖為唾液酸、半乳糖或葡萄糖。

7.如權利要求4所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)先配置X組濃度為2.0-20μM的pH＝5-9的不同種類的二肽類熒光探針水溶液，所述二肽為D、A、P這三種氨基酸中任意兩種氨基酸所形成的二肽，每組二肽類熒光探針水溶液包括Y份相同種類的二肽類熒光探針水溶液，X的數目與二肽的種類數目相同，Y的數目與已知唾液酸的種類數目相同，所述X大于等于3，在激發波長470nm條件下測其發射的熒光光譜，分別記錄一系列二肽熒光探針在500-550nm處的熒光強度I₀；

2)往其中一種二肽類熒光探針水溶液中加入一種已知種類的唾液酸，使其濃度在10-200μM，并混合均勻，在激發波長470nm條件下，測得加入唾液酸后的二肽熒光探針水溶液的熒光光譜，記錄其在500-550nm處的熒光強度I；

3)設定I/I₀小于0.4時為“on”狀態，I/I₀大于0.4時為“off”狀態；

4)重復步驟2)和3)，測定X組二肽類熒光探針水溶液中每組的Y份二肽類熒光探針水溶液對于Y種不同種類的已知等量唾液酸得到的不同on和off組合的特定響應規律；

5)以Y種唾液酸為橫軸，以X種二肽類熒光探針為縱軸建立on-off熒光變化正交矩陣；

6)參照步驟1)至步驟3)，測量未知種類唾液酸相對于X種二肽類熒光探針水溶液得到的X個I/I₀值，即可以得到X個不同on和off組合的特定響應規律，將所述未知唾液酸的特定響應規律與步驟5)得到的已知唾液酸的正交矩陣進行對比，如果重合即可判斷所述未知唾液酸的種類。