[發明專利]一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法

在審

• 申請號: 201710150525.7
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN106967168A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 金火喜;徐紅萍;楊立業;歐陽小琨
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司33109
• 代理人: 尉偉敏

技術領域

本發明涉及一種膠原蛋白肽的制備，尤其涉及一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法。

背景技術

膠原多肽是膠原或明膠經蛋白酶等降解處理后制得的介于蛋白質和氨基酸之間的產物，一般將由2到10個氨基酸通過肽鍵形成的直鏈肽稱為寡肽或小肽；由肽鍵結合起來的多于10個氨基酸的聚合體則稱為多肽。近年來，很多學者對肽的消化吸收機制進行了研究，認為肽甚至相當量的蛋白質在動物體內可以被完整吸收并被機體利用，如口服疫苗和酶法治療疾病。肽的轉運系統和游離氨基酸相比轉運速度更快。許多試驗表明，肽的添加還可以提高氨基酸的吸收速度。此外肽還能促進蛋白質沉積率，因為肽能直接用于人體蛋白質的合成。長期食用經過添加膠原蛋白肽的食品有助于改善皮膚彈性，延緩衰老，增強免疫力，同時食用方便，適合于大眾人群。

海參是重要的海洋食物和藥物資源。全世界有1000多種海參，其中40多種可供食用。近年來，我國海參養殖業發展極快，海參年產量已超過6萬噸。因此，亟待進一步開發海參的高值化加工技術。海參體壁含有結構獨特的活性物質如海參膠原蛋白、海參多糖、海參皂苷等。藥理實驗證明，海參具有抗腫瘤、提高免疫功能、降血脂、抗凝血、抗動脈粥樣硬化等多種生理活性。目前，國內外對海參活性成分的研究和開發主要集中在海參多糖和海參皂苷等方面。

海參膠原蛋白含量占海參體壁粗蛋白的60％以上，有關海參膠原蛋白類型和理化性質的研究已有報道(Comp Biochem Physiol，1995，112A：463-478；Food Chemistry andToxicology，2002，67(4)：1319-132；水產學報，2006，4：549-553)，中國發明專利CN 101215315A也公開了一種在低溫下(0-25℃)利用胃蛋白酶促溶提取海參膠原蛋白的方法。與膠原蛋白相比，膠原蛋白肽具有更易吸收和高生理活性等特點。有關海參多肽的研究已有報道，目前已公開的發明專利有CN 1858222A和CN 101191139A。這些研究中所述的海參多肽是一種至少包括海參皂苷、蛋白多肽和膠原多肽等活性物質的混合物。有關海參膠原蛋白活性肽尚未見報道。

發明內容

本發明提供了一種提高純度與提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人體吸收的東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法。

本發明通過以下技術方案：

一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，包括如下工藝步驟：

a.選取新鮮東海烏參為原料，4℃清水浸泡50-60min，撈出去除內臟后切成小塊，用浸泡液浸泡攪拌5天，撈出后使用打漿機進行打漿處理，加入35-40倍體積的純凈水后采用膠體磨進行研磨細化處理，得漿狀物；

b.將步驟a得到的漿狀物加入乙酸進行提取2-3天，離心合并上清液，加入添加劑靜置20-30min后15000r/min離心5min得到沉淀物，經鹽析、透析后凍干得到東海烏參膠原蛋白；

c.在步驟b得到的東海烏參膠原蛋白中，加入東海烏參膠原蛋白重量0.1-2％的胃蛋白酶，打開電腦微波-超聲波組合催化合成儀對酶解物進行超聲波-微波輔助酶解，其中超聲波的探頭插入深度固定不變，微波功率800W、超聲功率250W、超聲-微波處理溫度為41℃條件下處理15分鐘后，繼續酶解2h，加入東海烏參膠原蛋白重量0.2-0.5％的胰蛋白酶與1-3％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入東海烏參膠原蛋白重量0.3-0.5％的絲氨酸蛋白酶繼續酶解45min，升溫至120℃滅酶30min，得到酶解液；

d步驟c得到的酶解液在-20℃預凍1h，然后在-70℃冷阱溫度和＜150Pa真空度的條件下冷凍干燥8-10h，直接得到東海烏參膠原蛋白低聚肽；或者，步驟c得到的酶解液采用孔徑為0.1-0.5μm的管式膜脫除大分子，然后采用截留分子量為3kDa的超濾膜截留分級，截留液采用納濾膜濃縮脫鹽，然后在175-185℃進風溫度、75-85℃出風溫度和0.35-0.45MPa噴霧壓力的條件下噴霧干燥，得到東海烏參膠原蛋白低聚肽。在本技術方案中，步驟a中用浸泡液浸泡是為了去除鈣、鐵、錳、鎂、鋁、鉛等污染元素。

作為優選，步驟a中浸泡液為0.2M EDTA，pH8.0。

作為優選，步驟b中乙酸的含量為0.5M乙酸，其中含質量分數為0.1％胃蛋白酶。

作為優選，步驟b中添加劑由以下重量份的原料組成：食鹽5-7份、果糖6-10份、鹽酸硫胺素6-8份、谷氨酰胺10-15份與絲氨酸12-15份，添加劑的加入量為上清液質量的10-15％。