[發明專利]一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法

在審

• 申請號: 201710150525.7
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN106967168A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 金火喜;徐紅萍;楊立業;歐陽小琨
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，其特征在于，包括如下工藝步驟：

a.選取新鮮東海烏參為原料，4℃清水浸泡50-60min，撈出去除內臟后切成小塊，用浸泡液浸泡攪拌5天，撈出后使用打漿機進行打漿處理，加入35-40倍體積的純凈水后采用膠體磨進行研磨細化處理，得漿狀物；

b.將步驟a得到的漿狀物加入乙酸進行提取2-3天，離心合并上清液，加入添加劑靜置20-30min后15000r/min離心5min得到沉淀物，經鹽析、透析后凍干得到東海烏參膠原蛋白；

c.在步驟b得到的東海烏參膠原蛋白中，加入東海烏參膠原蛋白重量0.1-2％的胃蛋白酶，打開電腦微波-超聲波組合催化合成儀對酶解物進行超聲波-微波輔助酶解，其中超聲波的探頭插入深度固定不變，微波功率800W、超聲功率250W、超聲-微波處理溫度為41℃條件下處理15分鐘后，繼續酶解2h，加入東海烏參膠原蛋白重量0.2-0.5％的胰蛋白酶與1-3％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入東海烏參膠原蛋白重量0.3-0.5％的絲氨酸蛋白酶繼續酶解45min，升溫至120℃滅酶30min，得到酶解液；

d步驟c得到的酶解液在-20℃預凍1h，然后在-70℃冷阱溫度和＜150Pa真空度的條件下冷凍干燥8-10h，直接得到東海烏參膠原蛋白低聚肽；或者，步驟c得到的酶解液采用孔徑為0.1-0.5μm的管式膜脫除大分子，然后采用截留分子量為3kDa的超濾膜截留分級，截留液采用納濾膜濃縮脫鹽，然后在175-185℃進風溫度、75-85℃出風溫度和0.35-0.45MPa噴霧壓力的條件下噴霧干燥，得到東海烏參膠原蛋白低聚肽。

2.根據權利要求1所述的一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，其特征在于，步驟a中浸泡液為0.2M EDTA，pH8.0。

3.根據權利要求1所述的一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，其特征在于，步驟b中乙酸的含量為0.5M乙酸，其中含質量分數為0.1％胃蛋白酶。

4.根據權利要求1所述的一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，其特征在于，步驟b中添加劑由以下重量份的原料組成：食鹽5-7份、果糖6-10份、鹽酸硫胺素6-8份、谷氨酰胺10-15份與絲氨酸12-15份，添加劑的加入量為上清液質量的10-15％。

5.根據權利要求1所述的一種東海烏參膠原蛋白低聚肽的制備方法，其特征在于，步驟a中用浸泡液浸泡時，每隔12h更換一次浸泡液。