[發(fā)明專利]真核表達(dá)制備重組紅鰭東方鲀白介素2蛋白的基因及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710150095.9
• 申請(qǐng)日: 2017-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN106929514A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秀利;孫鶴;李慧;孔德榮;劉海映;仇雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/26
• 分類號(hào): C12N15/26;C07K14/55;C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 大連非凡專利事務(wù)所21220
• 代理人: 閃紅霞

1.一種真核表達(dá)制備重組紅鰭東方鲀白介素2蛋白的基因，其特征在于所述基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種真核表達(dá)制備重組紅鰭東方鲀白介素2蛋白的方法，其特征在于依次按照如下步驟進(jìn)行：

a. 將DNA序列如SEQ ID NO:1所示的基因克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA上，得到真核表達(dá)重組質(zhì)粒pPICZαA-IL-2；

b. 將得到的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pPICZαA-IL-2電轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115感受態(tài)中，篩選陽(yáng)性克隆；

c. 將篩選出的陽(yáng)性克隆接種到BMGY液體培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)大培養(yǎng)至OD_600nm=2~6，離心收集菌體；

d. 用無(wú)菌水重懸所收集的菌體，使OD_600nm=1.0~2.0，離心后收集菌體； BMMY液體培養(yǎng)基重懸菌體后轉(zhuǎn)接至100mL含BMMY液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，使OD_600nm=1.0~2.0；28~30℃、250~300 rpm震蕩培養(yǎng)96h，期間每24h向培養(yǎng)基中添加甲醇至終濃度為1.5%；12000rpm，4℃離心3min收集上清，PBS緩沖液透析，3KD超濾管濃縮，75%硫酸銨沉淀法再次濃縮上清中的蛋白，收集沉淀，即得重組紅鰭東方鲀白介素2蛋白。