[發明專利]一種金黃色葡萄球菌肽聚糖的多克隆抗體在審

申請號：	201710147906.X	申請日：	2017-03-14
公開（公告）號：	CN106749652A	公開（公告）日：	2017-05-31
發明（設計）人：	姬媛媛;苑慶華;趙麗	申請（專利權）人：	天津喜諾生物醫藥有限公司
主分類號：	C07K16/12	分類號：	C07K16/12;C07K16/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22
代理公司：	天津盛理知識產權代理有限公司12209	代理人：	韓奎勇
地址：	300480 天津市濱海新區***	國省代碼：	天津;12
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種金黃色葡萄球菌肽聚糖克隆抗體
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及抗體及其制備方法技術領域，具體是一種金黃色葡萄球菌肽聚糖的多克隆抗體。

背景技術

細菌對抗生素的耐藥性隨著新型及廣譜抗生素的廣泛使用而不斷發生變化，其中革蘭陽性菌(Gram-positive bacteria，G+)耐藥性問題尤為突出，以葡萄球菌、鏈球菌和腸球菌的耐藥性最為常見和嚴重。肽聚糖是革蘭陽性菌細胞壁主要成分。而人、動物和植物細胞中并不含有這樣的成分。因此，肽聚糖可以作為診斷是否為革蘭陽性菌感染的靶標。醫院內診斷革蘭陽性菌，一般是通過微生物培養的方法。這要求能夠獲得病患處的活體組織，在很多情況下，這是不能的。例如金黃色葡萄球菌肺炎常見于新生兒和幼童，在這種情況下，組織培養的手段是不可行的。另一方面，還可能使病原菌流傳開來，感染抵抗力較弱的病人。因此，開發非培養、非侵襲性的診斷方法是不僅關系到革蘭陽性菌感染患者的生命，也關系到醫院內其他病人的安全。其中，ELISA方法以其操作簡便、靈敏度高等優點，廣泛應用于臨床檢測和科學研究。

目前，在國內上并沒有可以應用于臨床的革蘭陽性菌快速診斷試劑盒。我國國家藥監局也沒有給予任何廠家該領域市場準入證和許可證。因此，國內在該領域的研究是空白。在國際市場上，只有日本WAKO一家公司生產可以用于檢測革蘭陽性菌快速診斷試劑盒SLP，但僅供科研。因此，研發具有自主知識產權的肽聚糖檢測試劑盒具有重要意義。而ELISA方法的關鍵是獲取合適的抗體，雙抗體夾心ELISA方法是本申請人準備研發的一種高效檢測方法，該方法勢必對抗體的要求很高，需要抗體之間能夠較好的配對。本申請人已獲取了一株具有廣譜性檢測革蘭陽性菌的肽聚糖單克隆抗體3F8，專利號為CN102675457A。僅利用此株單克隆抗體建立檢測革蘭氏陽性菌的間接競爭ELISA方法，靈敏度為1ug/ml，對于人血清樣本的檢測具有一定的局限性，但未取得預期結果。基于雙抗體夾心ELISA的高靈敏度的優點，為更高靈敏度檢測人血清樣本，因此，制備另一種抗體至關重要，故制備針對肽聚糖抗原的抗體成為開發該抗原檢測試劑盒的關鍵。

多克隆抗體的優點是可以識別同一抗原的多個表位。故在免疫檢測時，可識別更多的抗原，受抗原構象變化的影響較少。因此，采用多克隆抗體包被酶標板，可以捕獲更多的抗原，再與特異性強的單克隆抗體結合，既提高了方法的靈敏度，也增加了方法的特異性。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，而提供一種金黃色葡萄球菌肽聚糖的多克隆抗體，為雙抗體夾心ELISA方法的實現打下基礎，為應用于臨床的革蘭氏陽性菌快速診斷試劑盒的早日上市提供保障。

本發明實現目的的技術方案如下：

一種金黃色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗體，該肽聚糖多克隆抗體通過如下方法取得：

一、免疫動物

(1)以與單克隆抗體3F8相同免疫原的金黃色葡萄球菌肽聚糖作為免疫原，免疫新西蘭家兔；具體方法為：

①新西蘭家兔，篩選條件為：雄性，單重在2.5kg-3.0kg之間；

②首次免疫劑量為500ug糖/只，佐劑為弗氏完全佐劑，與二次免疫間隔時間為3周；

③二次免疫免疫劑量為250ug糖/只，佐劑為弗氏不完全佐劑，與三次免疫間隔時間為2周；

④三次及以后免疫劑量、途徑、佐劑同第二次免疫方式，兩次免疫之間的間隔時間為2周，至第六次免疫；

二、多克隆抗體的獲得