[發明專利]一種金黃色葡萄球菌肽聚糖的多克隆抗體在審
| 申請號： | 201710147906.X | 申請日： | 2017-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN106749652A | 公開（公告）日： | 2017-05-31 |
| 發明（設計）人： | 姬媛媛;苑慶華;趙麗 | 申請（專利權）人： | 天津喜諾生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/12 | 分類號： | C07K16/12;C07K16/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司12209 | 代理人： | 韓奎勇 |
| 地址： | 300480 天津市濱海新區*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 金黃色 葡萄球菌 肽聚糖 克隆 抗體 | ||
1.一種金黃色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗體，其特征在于該肽聚糖多克隆抗體通過如下方法取得：
一、免疫動物
(1)以與單克隆抗體3F8相同免疫原的金黃色葡萄球菌肽聚糖作為免疫原，免疫新西蘭家兔；具體方法為：
①新西蘭家兔，篩選條件為：雄性，單重在2.5kg-3.0kg之間；
②首次免疫劑量為500ug糖/只，佐劑為弗氏完全佐劑，與二次免疫間隔為3周；
③二次免疫免疫劑量為250ug糖/只，佐劑為弗氏不完全佐劑，與三次免疫間隔為2周；
④三次及以后免疫劑量、途徑、佐劑同第二次免疫方式，兩次免疫之間的間隔時間為2周，至第六次免疫；
二、多克隆抗體的獲得
(1)效價測定：免疫過程中，從第三免以后，每次免疫后7天采血測定效價，至第六免確定血清效價穩定；
(2)抗血清分離：六免后血清效價達到1：10000以上，股動脈放血收集血清樣本，分裝后-20℃保存；
(3)飽和硫酸銨鹽析法進行初步純化
①取定量家兔血清與PBS緩沖液等體積混勻后，緩慢加入2倍家兔血清體積的飽和硫酸銨溶液，并進行4℃過夜；
②次日離心，取沉淀并用PBS緩沖液溶解，再加入與PBS緩沖液等體積的飽和硫酸銨溶液，4℃透析，獲得初步純化產物；
(4)親和層析進一步純化得到多克隆抗體
采用GE ProteinA柱子進行親和層析純化，進一步純化后得到多克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗體，其特征在于在獲得肽聚糖多克隆抗體的方法中，所述步驟(1)中的免疫具體包括：背部皮下注射免疫、腹腔注射免疫及靜脈注射免疫。
3.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗體，其特征在于在獲得肽聚糖多克隆抗體的方法中，所述步驟(1)中選擇免疫的新西蘭家兔由人工飼養的鼠、馬、牛及羊替代，免疫劑量根據具體免疫動物種類，體重確定。
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