[發(fā)明專利]一種用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710145841.5
• 申請日: 2017-03-13
• 公開（公告）號: CN107058517B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔俊偉;張邊防;高漸聯(lián);周愛杰;李振云
• 申請（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 潘宏偉

1.雞蛋清和KCl在制備檢測結(jié)核分枝桿菌試劑盒中的用途，其特征在于，所述試劑盒由檢測引物、10倍環(huán)介導等溫擴增反應(yīng)液、DNA聚合酶、陽性對照、陰性對照、顯色劑和菌體擴培液組成；所述的檢測引物是由一對外引物F3/B3和一對內(nèi)引物FIP/BIP組成，

所述外引物F3的序列為：5’-CTGGGCCTCAAGCAAGG-3’

所述外引物B3的序列為：5’-CGACGTCGCTGACCACTT -3’

所述內(nèi)引物FIP的序列為：5’-CGGGCGACGGTTTCGAAGTCGGAAGACGGGGTCAACGGT -3’

所述內(nèi)引物BIP的序列為：

5’-CGGCTGCAAGAGATGGCGTCTTGGGTCACCCTCTCGT -3’

其中，所述的一對外引物F3/B3與一對內(nèi)引物FIP/BIP的摩爾數(shù)之比為1：6；所述的DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶，活力為8U/微升；所述的陰性對照為滅菌雙蒸水；

每升所述菌體擴培液由以下組分制成：5 g的葡萄糖、8 g的雞蛋清、6.7 μmol的EDTA、100 mL的甘油、30 mmol的二硫蘇糖醇、10 g的PEG-4000，余量為雙蒸水；每毫升所述顯色劑由以下組分制備而成：950-960 μL的20倍SYBR Green I、10-15 mg的KCl，余量為雙蒸水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞蛋清和KCl在制備檢測結(jié)核分枝桿菌試劑盒中的用途，其特征在于，所述陽性對照為含有結(jié)核分枝桿菌的人血清。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞蛋清和KCl在制備檢測結(jié)核分枝桿菌試劑盒中的用途，其特征在于，所述10倍環(huán)介導等溫擴增反應(yīng)液是由200 mmol/L 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、100mmol/L 氯化鉀、100 mmol/L 硫酸銨、40-100 mmol/L 硫酸鎂、4-10 mol/L甜菜堿、5-18mmol/L的dNTPs和質(zhì)量百分濃度0.1%的Triton X-100組成，溶劑為雙蒸水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞蛋清和KCl在制備檢測結(jié)核分枝桿菌試劑盒中的用途，其特征在于，每毫升所述顯色劑由以下組分制備而成：950 μL的20倍SYBR Green I、15 mg的KCl，余量為雙蒸水。