[發明專利]一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法

在審

• 申請號: 201710142455.0
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106916866A
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發明（設計）人: 黃運紅
• 申請（專利權）人: 江西師范大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/625
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 潘宏偉

1.一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：該博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法的具體步驟如下：

S1：在輪枝鏈霉菌菌種的新鮮斜面加入10ml無菌水，刮下白色孢子層后，所得的懸浮液經過濾后振蕩2min，制得單孢子溶液；

S2：利用滴定管吸取10ml單孢子溶液于無菌平板中，采用紫外線照射后，將其均勻涂布于無菌平板中培養，制備出耐性菌株；

S3：將耐性菌株接種至含有發酵培養基的三角瓶中，搖瓶發酵；

S4：將發酵后產生的發酵液經過過濾后用微量注射器各取上清液15μL，并滴于圓形層析濾紙小片上，且紙片貼在鑒定菌的培養板上，在37℃環境下培養14～20h，并取抑菌圈較大者進行復篩；

S5：利用HPLC色譜分析方法選取目標產物生產能力較高的菌株，并轉接于發酵培養基中，裝液量為50mL的三角瓶，在30℃、170r·min^-1的條件下搖床培養60～70h，得到作為發酵培養的種子液；

S6：以10％接種量將所得種子液接種到發酵培養基中進行搖床培養，發酵體系為300mL三角瓶裝液量為50mL，在30℃、200r·min^-1的條件下搖床培養6d；

S7：發酵結束后，收集發酵液，用10倍體積甲醇振蕩浸提24h后，將甲醇浸提液放入真空干燥箱中烘干后既得。

2.根據權利要求1所述的一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：所述步驟S2中，在采用紫外線照射時，紫外線發光光源為30W，260A，紫外線光源的照射距離為30cm。

3.根據權利要求1所述的一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：所述步驟S3中，發酵培養基為淀粉、糊精、大豆粉、葡萄糖、玉米漿、黃豆粉、酵母粉、硫酸銅和硫酸鋅的混合物，其PH值為6.5～7.0。

4.根據權利要求1所述的一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：所述步驟S4中，鑒定菌為枯草桿菌。

5.根據權利要求1所述的一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：所述步驟S5中，在采用HPLC定量分析中，液相色譜條件為色譜柱YWG，C₁₈，10μm，250×4.6mm。

6.根據權利要求1所述的一種博來霉素族衍生物的微生物發酵制備方法，其特征在于：所述步驟S7中，真空干燥箱的功率為3～5KW，烘干溫度為90～110℃。