[發明專利]一種無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法

在審

• 申請號: 201710142365.1
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106841455A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 張洪非;龐永強;付亞寧;朱風鵬;羅彥波;姜興益;李翔宇;胡少東;陳歡;韓書磊;劉彤;侯宏衛
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

技術領域

本發明涉及無煙氣煙草制品化學成分測定方法，具體涉及一種無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法。

背景技術

煙堿，也叫尼古丁，是一種存在于茄科植物中的生物堿，也是煙草的重要成分。煙堿分子含有一個手性中心，即四氫吡咯環上的2位碳原子，所以煙堿有兩個對映體：S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿。煙堿的兩個對映體具有完全不同含量、代謝機理和生理特性。因此需進行無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析。

目前關于煙堿的手性分析，主要是采用氣相色譜法進行研究，例如申請號為201610663534.1的專利《一種卷煙煙絲中煙堿的手性分析方法》，該方法前處理步驟復雜，并且檢測時間達到140min，不能滿足大量樣品的檢測，目前尚未有關于無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析的高效液相色譜方法。因此有必要開發一種靈敏度高、精密度好、適合大批量準確定量無煙氣煙草制品中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的方法。手性柱-正相液相色譜紫外檢測器在異構體分離方面有著明顯的優勢，因此通過大量實驗建立了無煙氣煙草制品中煙堿手性的正相液相色譜紫外檢測分析方法，該方法更適合用于大量樣品中煙堿的手性分析。

發明內容

本發明的目的正是以煙堿為研究對象，對無煙氣煙草制品樣品進行了前處理方法研究，建立了手性柱-正相液相色譜紫外檢測的無煙氣煙草制品中煙堿旋光異構體的分析方法，實現了對無煙氣煙草制品中煙堿旋光對映體S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的準確測定。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：將無煙氣煙草制品樣品干燥、粉碎和過篩，樣品經過氫氧化鈉溶液浸潤后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液經基質分散固相萃取凈化后，使用手性柱-正相液相色譜紫外檢測器分析，采用峰面積歸一化法定量檢測煙草及煙草制品中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的比例。具體步驟如下：

1. 標準溶液的配制：稱取約100.0 mg的S-(-)-煙堿標準品，用正己烷和甲醇溶液（98:2，V/V）稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為2.0 mg/mL的S-(-)-煙堿標準儲備液；稱取約50.0 mg的R-(+)-煙堿標準品，用正己烷和甲醇溶液（98:2，V/V）稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為1.0 mg/mL的R-(+)-煙堿標準儲備液；利用S-(-)-煙堿標準儲備液和R-(+)-煙堿標準儲備液稀釋，配制S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿濃度分別為100 μg/mL和5 μg/mL的混合標準溶液，另外分別稀釋得到100 μg/mL的S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿標準溶液。

2. 無煙氣煙草制品樣品的混勻：將無煙氣煙草制品樣品置于40 ^oC烘箱中，1小時后將無煙氣煙草制品取出，粉碎后過0.45毫米孔徑標準篩。

3. 無煙氣煙草制品樣品的萃取：稱取0.3 g已粉碎的樣品于15mL具塞離心管中，加入2.0 mL 5% 的氫氧化鈉溶液，渦旋1min混勻后靜置10 min浸潤樣品。取10 mL甲基叔丁基醚和甲醇（90:10，V/V）溶液到離心管中，并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min。

4. 萃取液的凈化：取1.5 mL萃取后上清液于2 mL凈化離心管中（內含150 mg無水硫酸鎂，25 mg PSA吸附劑，7.5 mg GCB吸附劑，統稱基質分散固相萃取材料），于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min，以10000 rpm離心1min。取上清液過0.45 μm有機相濾膜后進液相分析。

5. 正相高效液相色譜條件：采用對照標樣（即混合標準溶液）與樣品中煙堿色譜峰的保留時間進行S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的定性分析，對峰面積進行歸一化定量S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿占總煙堿的比例。分析柱為Chiralcel OD-H液相色譜柱(柱長 250 mm ，內徑4.6 mm ，固定相粒徑5 μm)；流動相為正己烷和甲醇溶液（98:2 ，V/V），流速1 mL/min；等度洗脫；柱溫30 ℃；進樣體積 10 μL；紫外檢測器檢測波長252 nm；分析時間15 min。

本發明提供了一種無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，具有以下優良效果：可減低樣品液對色譜柱的污染，液相檢測方法靈敏度高，分析時間短，能實現對S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的基線分離，R-(+)-煙堿的檢出限（LOD）為0.08%，能夠滿足大批量無煙氣煙草制品樣品中煙堿的手性分析。

附圖說明

圖1為混合標準溶液的色譜圖；