[發(fā)明專利]一種無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710142365.1
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106841455A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張洪非;龐永強(qiáng);付亞寧;朱風(fēng)鵬;羅彥波;姜興益;李翔宇;胡少東;陳歡;韓書磊;劉彤;侯宏衛(wèi)
• 申請（專利權(quán)）人: 國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

1.一種無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，其特征在于：將無煙氣煙草制品樣品干燥、粉碎和過篩，樣品經(jīng)過氫氧化鈉溶液浸潤后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化后，使用手性柱-正相液相色譜紫外檢測器分析，采用峰面積歸一化法定量檢測無煙氣煙草制品中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的比例；

具體步驟如下：

1). 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取約100.0 mg的S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷和甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為2.0 mg/mL的S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液；稱取約50.0 mg的R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷和甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為1.0 mg/mL的R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液；利用S-(-)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液和R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋，配制S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿濃度分別為100 μg/mL和5 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，另外分別稀釋得到100 μg/mL的S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液；

2). 無煙氣煙草制品樣品的混勻：將無煙氣煙草制品樣品置于40 ^oC烘箱中，1小時后將無煙氣煙草制品取出，粉碎后過0.45毫米孔徑標(biāo)準(zhǔn)篩；

3). 無煙氣煙草制品樣品的萃取：稱取0.3 g已粉碎的樣品于15mL具塞離心管中，加入2.0 mL 5% 的氫氧化鈉溶液，渦旋1min混勻后靜置10 min浸潤樣品，取10 mL甲基叔丁基醚/甲醇溶液到上述具塞離心管中，并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min；

4). 萃取液的凈化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL內(nèi)含有基質(zhì)分散固相萃取材料的凈化離心管中，于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min，以10000 rpm離心1min，取上清液過0.45 μm有機(jī)相濾膜后進(jìn)液相分析；

5).正相高效液相色譜條件：分析柱為Chiralcel OD-H液相色譜柱，柱長 250 mm ，內(nèi)徑4.6 mm ，固定相粒徑5 μm；流動相為正己烷和甲醇溶液，流速1 mL/min；等度洗脫；柱溫30 ℃；進(jìn)樣體積 10 μL；紫外檢測器檢測波長252 nm；分析時間15 min；采用對照標(biāo)樣與樣品中煙堿色譜峰的保留時間進(jìn)行S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的定性分析，對峰面積進(jìn)行歸一化定量S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿占總煙堿的比例。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，其特征在于：步驟3)中甲基叔丁基醚/甲醇溶液的體積比90:10。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，其特征在于：步驟4)中所述的基質(zhì)分散固相萃取材料含：150 mg無水硫酸鎂，25 mg PSA吸附劑，7.5 mg GCB吸附劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，其特征在于：步驟5)中流動相正己烷和甲醇的體積比為98:2 。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無煙氣煙草制品中煙堿的手性分析高效液相色譜法，其特征在于：步驟1）中標(biāo)準(zhǔn)溶液配制時正己烷和甲醇溶液的體積比為98:2。