[發(fā)明專利]快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710142227.3
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106967793B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王明懷;林軍;黃金華;張良波;張應(yīng)中;徐煲鏵;張紹勛;鄺兆勇;鄧文劍;葉代全;何禎祥
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

本發(fā)明公開了一種快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法，所述鑒定方法是以光皮梾木的DNA作為模板，SEQ ID No:1～30作為引物對，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得微衛(wèi)星分子標(biāo)記數(shù)據(jù)；再對微衛(wèi)星分子標(biāo)記數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，鑒定歸類光皮梾木種群。本發(fā)明的快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法在非破壞性取樣的前提下快速獲得基因組信息，工作量少且效率高，同時判別準(zhǔn)確率高達(dá)95％，具有準(zhǔn)確、省時和省力的優(yōu)勢；對于物種種群的快速分子檢測具有重要價值和應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法。

背景技術(shù)

光皮梾木(Cornus wilsonianaWanger)又名光皮樹、油樹、狗骨木、斑皮抽水樹等，屬山茱萸科梾木屬，是我國特有的多用途鄉(xiāng)土木本油料樹種。光皮梾木果油作為食用油已有100年歷史,1981年經(jīng)國家糧食部鑒定，光皮梾木油為一級食用油；2013年12月，國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會批準(zhǔn)光皮梾木果實(shí)油為我國的新食品原料。動物和臨床試驗(yàn)結(jié)果表明光皮梾木油可顯著降低體內(nèi)膽固醇，防治高血脂癥，尤其是老年高血脂癥，同時具有減肥功效。光皮梾木是一種兼有經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和社會效益的重要油料樹種。

但是，一般從表型特征很難區(qū)分光皮梾木的種群，尤其是在上個世紀(jì)70-80年代，曾經(jīng)在一定的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行過人為的廣泛傳播，對于收集、選擇和建立基因庫帶來一定的難度。因此，急需解決判定種群起源的準(zhǔn)確方法，為開展光皮梾木的育種提供必要的技術(shù)支持。

植物的基因組具有很好的穩(wěn)定性，基本上不受環(huán)境影響，且取材方便。因此，通過對植株在基因組差異性的檢測來追蹤其起源是完全可行的。

DNA分子標(biāo)記是快速鑒定生物基因組差異的重要方法之一，其中微衛(wèi)星標(biāo)記具有多態(tài)性高、穩(wěn)定性好、操作便捷等諸多優(yōu)點(diǎn)，通過對目標(biāo)植物種群進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記的檢測，不僅可以區(qū)分在性狀上存在明顯差異的個體，而且能夠有效判別種群水平上的相似性。

目前國內(nèi)外尚無對光皮梾木種群分子快速鑒定的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種非破壞性取樣下快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法及其引物對，該鑒定方法準(zhǔn)確、省時、省力。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：

一種快速鑒定光皮梾木種群的分子檢測方法，包括以下步驟：

(1)、以光皮梾木的DNA為模板，分別以SEQ ID No:1～2、SEQ ID No:3～4、SEQ IDNo:5～6、SEQ ID No:7～8、SEQ ID No:9～10、SEQ ID No:11～12、SEQ ID No:13～14、SEQID No:15～16、SEQ ID No:17～18、SEQ ID No:19～20、SEQ ID No:21～22、SEQ ID No:23～24、SEQ ID No:25～26、SEQ ID No:27～28、以及SEQ ID No:29～30作為引物對，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得微衛(wèi)星分子標(biāo)記數(shù)據(jù)；

(2)、對上述微衛(wèi)星分子標(biāo)記數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，鑒定歸類光皮梾木種群。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

步驟S1，94℃下預(yù)變性5min；

步驟S2，94℃下變性30s；

步驟S3，57℃下退火30s；

步驟S4，72℃下延伸20s；

步驟S5，將所述步驟S2至所述步驟S4重復(fù)35次，且最后一次的所述步驟S4持續(xù)10min。