[發明專利]羊口瘡疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710138033.6
• 申請日: 2017-03-09
• 公開（公告）號: CN106983860A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 鮮思美;李鵬飛;馮將;劉嬡;李婷;張益;包細明;張素輝;許國洋
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A61K39/275
• 分類號: A61K39/275;A61K39/39;A61P31/20;A61P1/02
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 黎昌莉

技術領域

本發明屬于免疫疫苗技術領域，具體涉及一種羊口瘡疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

羊口瘡(Orf)，又名羊傳染性膿皰、羊傳染性膿皰皮炎、羊傳染性膿皰口炎，是由羊口瘡病毒(Orf virus，0rfV)引起的綿羊和山羊急性、高度接觸性、嗜上皮性人獸共患傳染病，羊口瘡病毒為副痘病毒屬成員之一，基因組全長134～139kb，中央編碼區(ORFs009-111)較為保守。

感染羊口瘡病毒的羊以口唇、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、水皰、膿皰和結成疣狀結痂為特征，不同地區分離的病毒抗原性不完全一致。感染羊口瘡病毒的羊生產性能下降，采食困難、消瘦并長期帶毒，給養羊業及飼養人員的健康帶來嚴重的危害。該病幾乎遍布全世界所有養羊的國家和地區，而且我國是該病流行嚴重的國家，每年感染ORFV的羊不少于500萬只。

羊口瘡病毒(ORFV)的成熟病毒粒子呈磚形或橢圓形毛線團樣外觀，外層由較厚的囊膜包裹，與VACV相似也具有IMV、EEV等多種病毒粒子形式(Rziha et al.,2003)。臨床預防羊口瘡的主要手段是接種疫苗，常用的有滅活苗和細胞弱毒苗，但存在產生抗體水平較低，免疫保護期短，不宜大量生產、儲存的缺點。目前對該病尚無特效的治療方法，只能采取臨床外傷處置及支持療法，在防控上國內外主要采取接種羊口瘡弱毒活疫苗進行預防，但這種疫苗仍不能夠徹底消除和控制該病，在免疫力和安全性方面均存在一定的缺陷，因此，創制安全、高效的新型疫苗勢在必行，新型基因工程疫苗的研究具有重要的意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種羊口瘡疫苗及其制備方法和應用，所述羊口瘡疫苗含有可以表達兩個高度保守的羊口瘡基因的真核表達質粒和可以表達細胞因子IL-2基因的真核表達質粒作為疫苗抗原，對新型羊口瘡疫苗的研究具有重要的意義。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：

免疫原性組合物，所述免疫原性組合物由真核表達質粒pVAX1-FIL，pVAX1-B2L和pVAX1-IL-2組成。

進一步，所述真核表達質粒pVAX1-FIL中含有羊口瘡病毒FIL的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:1所示；所述真核表達質粒pVAX1-B2L中含有羊口瘡病毒B2L的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:2所示；所述真核表達質粒pVAX1-IL-2中含有山羊IL-2的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:3所示。

羊口瘡病毒B2L基因是OrfV第11個開放閱讀框，不同學者的研究表明，不同宿主和地區B2L基因僅在個別基因位點出現變異，其編碼大小約為42kD病毒囊膜蛋白為重要的保護性抗原之一，可刺激機體中和抗體的產生和淋巴細胞的釋放，可誘導機體產生強烈的免疫應答。

羊口瘡病毒F1L基因是OrfV第59個完整開放閱讀框，編碼39kD蛋白，是病毒表面的微管組成成分之一，能夠介導細胞免疫和誘導機體產生中和抗體，還與病毒的吸附和侵入有關。雖然不同地區、不同宿主的OrfV F1L基因長度各不相同，但是F1L基因高度保守，F1L基因是OrfV新型疫苗研究中的一個重要免疫原性基因。

白細胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)是一種最早發現的具有廣泛生物活性的細胞因子，它能刺激T、B細胞生長增殖，激活T細胞分泌IFN-γ、CSF等，并增強Tc(Cytotoxic T cel1)、NK、巨噬細胞的細胞毒活性，增強抗原提呈作用，是調節機體誘導免疫的重要細胞因子。由于它能夠有效地提高免疫功能，醫學上已用于預防和治療一些常規方法難以治療的疾病，如腫瘤等。

進一步，所述真核表達質粒pVAX1-FIL，真核表達質粒pVAX1-B2L和真核表達質粒pVAX1-IL-2的OD_260-280數值為1.8-2.0。

進一步，所述真核表達質粒pVAX1-FIL、pVAX1-B2L和pVAX1-IL-2的體積比為1-2：1-2：1.5-3。

作為一種優選，所述真核表達質粒pVAX1-FIL、pVAX1-B2L和pVAX1-IL-2的體積比為1：1：2。

本發明的目的之二在于提供一種羊口瘡疫苗，所述羊口瘡疫苗的有效成分為以上所述的免疫原性組合物。