[發明專利]羊口瘡疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710138033.6
• 申請日: 2017-03-09
• 公開（公告）號: CN106983860A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 鮮思美;李鵬飛;馮將;劉嬡;李婷;張益;包細明;張素輝;許國洋
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A61K39/275
• 分類號: A61K39/275;A61K39/39;A61P31/20;A61P1/02
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 黎昌莉

1.免疫原性組合物，其特征在于，所述免疫原性組合物由真核表達質粒pVAX1-FIL，pVAX1-B2L和pVAX1-IL-2組成。

2.根據權利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述真核表達質粒pVAX1-FIL中含有羊口瘡病毒F1L的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:1所示；所述真核表達質粒pVAX1-B2L中含有羊口瘡病毒B2L的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:2所示；所述真核表達質粒pVAX1-IL-2中含有山羊IL-2的全基因編碼序列，如SEQ ID NO:3所示。

3.根據權利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述真核表達質粒pVAX1-FIL，真核表達質粒pVAX1-B2L和真核表達質粒pVAX1-IL-2的OD_260-280數值為1.8-2.0。

4.根據權利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述真核表達質粒pVAX1-FIL、pVAX1-B2L和pVAX1-IL-2的體積比為1-2：1-2：1.5-3。

5.羊口瘡疫苗，其特征在于，所述羊口瘡疫苗的有效成分為權利要求1-4任一項所述的免疫原性組合物。

6.根據權利要求5所述的羊口瘡疫苗，其特征在于，所述羊口瘡疫苗還包括藥學上可接受的載體或助劑。

7.權利要求5所述的羊口瘡疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備真核表達質粒pVAX1-FIL：

a以pMD18T-F1L克隆質粒為模板，進行PCR目的基因F1L的擴增；

b將得到的F1L基因和pVAX1載體均采用HindⅢ和EcoRⅠ雙酶切后，進行連接和轉化，再經鑒定和提取，得基因真核表達質粒pVAX1-FIL；

2)制備真核表達質粒pVAX1-B2L：

a以pMD18T-B2L克隆質粒為模板，進行PCR目的基因B2L的擴增；

b將得到的B2L基因和pVAX1載體均采用HindⅢ和EcoRⅠ雙酶切后，進行連接和轉化，再經鑒定和提取，得基因真核表達質粒pVAX1-B2L；

3)制備真核表達質粒pVAX1-IL-2：

a提取山羊淋巴細胞中RNA，進行PCR目的基因IL-2的擴增；

b將得到的IL-2基因與pMD19-T載體進行連接，再經轉化得重組質粒；

c采用HindⅢ和EcoRⅠ對pVAX1載體和重組質粒進行雙酶切，得IL-2基因目的片段和pVAX1載體片段；

d將得到的IL-2基因目的片段和pVAX1載體片段進行連接和轉化，再經鑒定和提取，得基因真核表達質粒pVAX1-IL-2；

4)按上述比例將真核表達質粒pVAX1-FIL、真核表達質粒pVAX1-B2L和真核表達質粒pVAX1-IL-2混合制劑，得羊口瘡疫苗。

8.根據權利要求7所述的制備方法，所述真核表達質粒pVAX1-IL-2為提高免疫原性的佐劑。

9.權利要求1-4任一項所述的免疫原性組合物或權利要求5所述的羊口瘡疫苗在制備預防羊口瘡的藥物中的應用。

10.預防羊口瘡的組合物，其特征在于，所述組合物由表達F1L基因的真核表達質粒和/或表達B2L基因的真核表達質粒，表達IL-2基因的真核表達質粒組成。