[發明專利]一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201710137381.1
• 申請日: 2017-03-09
• 公開（公告）號: CN106932568B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 趙彥華;諸宗偉;邢振遠;劉媛媛;馬洪敏;魏琴;張勇;吳丹
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器制備方法。本發明利用聚苯胺金納米復合物為基底，結合載體聚多巴胺微球獨特的吸附功能，將電化學發光半導體納米材料固載到電極的界面，得到很好的發光信號。同時利用聚多巴胺微球和聚苯胺金納米復合物良好的生物相容性，固定抗體，然后將ITO玻璃高溫煅燒。此技術不僅操作簡便，制得的傳感器有較好的電化學發光性能，而且還實現了對不同生物標志物的檢測信號進行長久保存，解決了納米材料及生物分子缺乏簡單而有效的電極固定方法等問題。該方法可以適用于多種生物標志物免疫傳感器的制備，在科研和臨床中具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及納米科學、生物傳感檢測技術、電化學發光等領域，具體涉及一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法。

背景技術

近幾十年來，生物傳感器蓬勃發展，為早期臨床診斷帶來了關鍵性的突破，高靈敏度、高選擇性的生物傳感器，一直是國內外分析化學工作者的研究熱點，在環境監測、食品安全、臨床分析等領域具有廣闊的應用前景。電化學發光傳感器具有靈敏度高、易于小型化的特點在實際應用中具有巨大的優勢，而穩定響應性的電極傳感界面是構建這類電化學發光傳感器的關鍵。

納米材料具有優越的導電性、較大的比表面積和良好的生物兼容性，已經被廣泛應用于電化學發光傳感器的構建。在構建過程中，既可以作為基底物質，也可以作為生物標記物的放大信號。但納米材料在構建傳感器的過程中存在從傳感界面脫落，對底物選擇性差，低生物識別能力等問題。另外，早期的電化學免疫傳感器通常通過對抗原或抗體進行酶標記來檢測信號，但是酶對環境要求較高，特別是酶結合到固體載體表面后容易失活。基于具有酶催化活性的納米材料構建的無酶電化學免疫傳感器引起了人們極大的研究興趣。因此在構建傳感器時，采用界面轉化的技術實現發光信號的長期穩定保存，可以解決納米材料在傳感器應用中存在的諸多問題，為電化學發光傳感器的發展和創新提供了新的思路，具有十分重要的研究意義。

本發明利用聚苯胺金納米復合物為基底材料，以具有獨特結構的聚多巴胺微球為載體，實現了電化學發光半導體納米材料在電極界面的固定與高效發光。同時利用聚多巴胺微球和聚苯胺金納米復合物良好的生物相容性，固定生物標志物實現傳感器的構建。利用ITO玻璃高溫煅燒構建電化學發光免疫傳感器，該方法不僅操作容易，具有較高的電化學發光性能，而且對不同生物標志物的檢測信號進行長久保存，解決了納米材料及生物分子缺乏簡單而有效的電極固定方法等問題。該方法可以適用于多種生物標志物免疫傳感器的制備，在科研和臨床中具有廣泛的應用前景。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種簡單易行的界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，既可以對生物標志物高效靈敏的檢測，還可以實現定量檢測。

本發明的目的之二是聚苯胺金納米復合物對二抗標記物具有很好的固定作用，通過高溫煅燒，解決了電極修飾材料脫落、重現性差等問題。

本發明的目的之三是提供長久保存、低成本、通用的生物標志物檢測方法，為電化學發光免疫傳感器在臨床中的應用提供技術基礎。

本發明的技術方案如下：

1.一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將6 μL聚苯胺金納米復合物滴在處理、活化好0.5 cm × 3.5 cm的ITO電極表面，于4 ^°C冰箱中儲存備用；

（2）將6 μL 10 μg·mL^-1抗體溶液滴涂在步驟（1）制得的電極表面，4 ^°C冰箱中孵化1 h；

（3）滴加5 μL、質量分數為1 %的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4 ^°C冰箱中孵化1 h，超純水清洗晾干；滴加6 μL濃度為0.001 ~ 20 ng/mL的一系列不同濃度的生物標志物溶液，4 ^°C下孵化1 h，超純水洗凈，晾干；