[發明專利]一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201710137381.1
• 申請日: 2017-03-09
• 公開（公告）號: CN106932568B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 趙彥華;諸宗偉;邢振遠;劉媛媛;馬洪敏;魏琴;張勇;吳丹
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將6 μL聚苯胺金納米復合物滴在處理、活化好0.5 cm × 3.5 cm的ITO電極表面，于4 ^°C冰箱中儲存備用；

（2）將6 μL 10 μg·mL^-1抗體溶液滴涂在步驟（1）制得的電極表面，4 ^°C冰箱中孵化1h；

（3）滴加5 μL、質量分數為1 %的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4 ^°C冰箱中孵化1 h，超純水清洗晾干；滴加6 μL濃度為0.001 ~ 20 ng/mL的一系列不同濃度的生物標志物溶液，4 ^°C下孵化1 h，超純水清洗，晾干；

（4）滴加6 μL聚多巴胺納米微球負載氮化碳納米片標記的抗體溶液，4 ^°C冰箱中孵化1h，超純水清洗晾干，之后在400 ^°C條件下煅燒30 min，作為工作電極，進行電化學發光測試。

2.如權利要求1所述的一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，所述聚苯胺金納米復合物溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟：

將5 mL 0.8 ~ 2.0 mM的HAuCl₄溶液置于45 ^°C水浴鍋中預熱10 min，之后緩慢加入0.5mL 20 mM的苯胺-環己烷溶液，反應12 h，將產品11000 rpm離心10 min，水洗三次，最后將得到的聚苯胺金納米復合物分散到3 mL超純水中，4 ^°C保存。

3.如權利要求1所述的一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，所述聚多巴胺納米微球負載氮化碳納米片溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）聚多巴胺納米微球溶液的制備

80~120 mg鹽酸多巴胺加入到80~120 mL pH = 8.8的Tris緩沖溶液與30~70 mL異丙醇的混合液中，在室溫下避光反應24 h，將產品離心分離并用超純水洗滌三次，之后將產物分散到5 mL超純水中；

（2）氮化碳納米片溶液的制備

5 g雙氰胺置于馬弗爐中，550 ^°C 燒4 h，升溫速率5^°C /min，之后冷卻至室溫，稱取100mg 氮化碳置于100 mL超純水中，先用破壁機打磨10 ~20 min，再超聲分散4 ~ 8 h，將產品5000 rpm 離心10 min，上層溶液備用；

（3）聚多巴胺納米微球負載氮化碳納米片溶液的制備

1 mL 聚多巴胺納米微球溶液加入2 mL氮化碳納米片溶液，超聲15 min，置于4 ^°C下震蕩6 h，離心分離，之后將產物分散到1 mL超純水中。

4.根據權利要求1所述的一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述的生物標志物為癌胚抗原、前列腺特異性抗原、胰島素、甲胎蛋白、乳腺癌易感基因中的一種。

5.根據權利要求1所述的一種基于界面轉化電化學發光免疫傳感器的制備方法，制備的傳感器用于生物標志物檢測，其特征在于，步驟如下：將煅燒后的ITO電極作為工作電極，Ag/AgCl電極作為參比電極，Pt電極作為對電極，用pH為7.4的PBS緩沖溶液配制的50mmol·L^-1的K₂S₂O₈溶液作為底液，在電化學發光工作站上以循環伏安模式測定-1.1 ~ 0 V電勢下的發光信號，實現對生物標志物的檢測。