[發明專利]一種新型負載大黃素用納米粒子的制備方法

在審

• 申請號: 201710133054.9
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN106963745A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 鄒川;盧釗宇;吳禹池;劉旭生;林啟展;盧富華;吳秀清
• 申請（專利權）人: 廣東省中醫院
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/34;A61K47/10;A61K47/36;A61K47/22;A61K31/122
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于生物黏附性藥物載體的技術領域，具體涉及一種新型負載大黃素用納米粒子的制備方法。

背景技術

殼聚糖(Chitosan,CS)又名2-氨基-2-脫氧-β-D-葡糖,是甲殼素(2-乙酸氨基-2-脫氧-β-D-葡糖)脫乙酰化的產物。甲殼素又名蟹殼素、甲殼質、幾丁質和殼多糖等，是一種天然的線性多糖,是甲殼綱動物外殼的重要成分,也存在于低等植物如菌、藻類的細胞壁中。由于殼聚糖無毒，且具有優良的生物相容性，在生物體內易降解等特點，被廣泛應用于醫用輔料領域，殼聚糖能與黏膜蛋白形成氫鍵和靜電作用，具有良好的生物黏附性能，但這種基于非共價鍵的黏附作用不保證藥物在指定部位的持續釋放，限制了殼聚糖的應用，而殼聚糖經巰基化后，黏附性能顯著提高，這是因為硫化聚合物(thiomers)能夠與黏膜層形成二硫鍵，與黏蛋白中半胱氨酸豐富的亞區發生特異性結合。

然而巰基化聚合物到目前為止作為疏水性藥物載體應用并不理想，這是由于巰基化聚合物與疏水藥物分子作用很弱，常常導致藥物釋放、快、不持續釋放、包封率較差現象。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于針對上述現有技術的不足，提供一種新型負載大黃素用納米粒子的制備方法，該新型巰基化納米粒子通過分步合成的方法合成巰基化mPEG-PLA-CS-MBI納米粒子，合成過程中最后親水性聚乙二醇單甲醚(mPEG)與聚乳酸(PLA)和殼聚糖(CS)形成mPEG-PLA-CS聚合物，并在此基礎上通過5-氨基-2-巰基苯并咪唑(MBI)使聚合物巰基化，最終形成巰基聚合物(mPEG-PLA-CS-MBI)。該巰基聚合物(mPEG-PLA-CS-MBI)可負載疏水性藥物如大黃素等用作緩釋藥物。巰基聚合物通過巰基氧化形成二硫鍵粘附于黏膜表面，賦予納米粒子更強的黏附性能，達到延長藥物在黏膜上的滯留時間，有利于藥物分子的緩釋。同時，改性后殼聚糖與藥物結合形成納米復合物后，mPEG可在復合物表面形成核-殼結構膠束，保護納米復合物不被網狀內皮系統(RES系統)識別和清除，使得所制得的粒子具有表面穩定作用，能促進復合物粒子在體內的長循環目的。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種新型負載大黃素用納米粒子的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟一：將5g～20g左旋丙交酯、2g～10g聚乙二醇單甲醚和0.2g～1g異辛酸亞錫溶解于20mL二氯甲烷中，在130℃的條件反應18h后置于冰乙醚中沉淀3次，再在40℃的真空條件下干燥3天，得到第一中間產物mPEG-PLA-OH；

步驟二：將10g步驟一中制備的第一中間產物mPEG-PLA-OH、2g丁二酸酐和1.2g 4-二甲氨基吡啶溶于100mL氯仿中，攪拌均勻后加入2mL三乙胺，在室溫條件下反應3天，然后置于乙醚中沉淀3次，經過濾得到濾渣，再將所述濾渣在40℃的真空條件下干燥3天，最后得到第二中間產物mPEG-PLA-COOH；

步驟三：將2.5g步驟二中制備的第二中間產物mPEG-PLA-COOH溶于40mL的二氯甲烷中，再加入0.7g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和0.7g N-羥基琥珀酰亞胺，在室溫條件下反應24h，旋蒸后溶于二甲基亞砜溶液中，再加入到添加有殼聚糖的60mL二甲基亞砜中反應24h，透析3天，冷凍干燥，得到第三中間產物mPEG-PLA-CS；所述殼聚糖的添加量為0.1g～1g，脫乙酰度為85％；

步驟四：將0.5g步驟三中制備的第三中間產物mPEG-PLA-CS溶于140mL水中，再加入0.3g高碘酸鈉溶液，室溫孵化2h后，加入300μL的乙二醇，在室溫條件下反應2h，透析3天，冷凍干燥，得到第四中間產物mPEG-PLA-CS-CHO，并在4℃下保存；所述高碘酸鈉溶液的濃度是2.14g/L；

步驟五：將0.2g～1g 5-氨基-2-巰基苯并咪唑和0.2g步驟四中制備的第四中間產物mPEG-PLA-CS-CHO溶于在40mL二甲基亞砜溶液中，并在室溫條件下孵化2h，然后加入0.2g～2g的氰基硼氫化鈉，再在室溫條件下反應24h～72h，透析3天，冷凍干燥，得到用于負載大黃素的巰基化mPEG-PLA-CS-MBI納米粒子，并在4℃下保存；

步驟三中所述二甲基亞砜溶液和步驟五中所述二甲基亞砜溶液均由二甲基亞砜和水按照1:1的體積比混合而成。

上述一種新型負載大黃素用納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟一中所述聚乙二醇單甲醚的平均分子量為1000～4000。