[發明專利]一種檢測前列腺特異性抗原PSA的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710131799.1
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106932570A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 肖建如;李博;周娉婷;陳天睿;魏海峰;蔡維濼;由賀;李嵩
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532;G01N35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙)31262
• 代理人: 周春洪

1.一種前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括如下檢測試劑：

(1)PSA試劑1號成分：

(2)PSA試劑2號成分：

2.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PSA質控品，所述PSA質控品為含PSA抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述PSA抗原提取自人精液。

3.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PSA校準品，所述PSA校準品為含PSA抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述PSA抗原提取自人精液。

4.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述PSA膠體金的標記方法如下：

(1)用0.1mol/LK₂CO₃或0.1mol/LHCl調節金溶膠至pH6.8；

(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的PSA抗體溶液，攪拌2～3分鐘；

(3)加入5ml 1％PEG20000溶液；

(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液；

(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/ml PEG20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復，濃度以A1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存；

(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于Sephadex G-200柱進行凝膠層析分離純化，以含0.1％BSA的緩沖溶液洗脫。

5.根據權利要求4所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述金溶膠的制備方法如下：

(1)膠體金的燒制應在24小時內完成；

(2)用量筒稱取所需量的水，將其倒入燒杯中，在燒杯上液面處用記號筆劃線，將水煮至沸騰；

(3)將1％的氯金酸溶液按照3:100的比例迅速加入到2的液體中；

(4)將1％檸檬酸鈉溶液按4.5:100加入到沸騰的3的液體中，混合均勻，保持沸騰5分鐘至液體呈穩定的酒紅色；

(5)停止加熱，冷卻至室溫；

(6)用水補足至劃線處，將膠體金倒入廣口瓶中，用封口膜密封，得到金溶膠。

6.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的最低檢測限低于0.1ng/ml，重復性小于15％，批間差小于15％。

7.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，將(80±16)ng/ml的樣本倍比稀釋為5種濃度，將每一濃度的樣本重復檢測2次，計算平均值，將結果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，線性相關系數大于等于0.999。

8.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒測量結果的測量偏差在±10％范圍內。

9.根據權利要求1所述前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒與癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)交叉反應均小于1‰。

10.權利要求1-3任一所述試劑盒在前列腺特異性抗原定量檢測中的用途，用于：

(1)在前列腺特異性抗原定量檢測中的應用；

(2)在制備人前列腺特異性抗原定量檢測產品中的應用；

(3)待測樣本中檢測前列腺特異性抗原的定量檢測方法：將目標濃度為0、0.5、5、15、50和100ng/ml的前列腺特異性抗原校準品加入全自動生化分析儀，以水為零點，建立工作曲線。

操作步驟：

計算方法：

計算校準液吸光度差值(A2-A1)，并建立校準液吸光度－濃度工作曲線。

計算樣本的吸光度差值，在工作曲線上讀取對應濃度值。

質控程序：測量PSA質控品，測試結果在質控范圍內方可進行標本檢測。