[發明專利]一種檢測前列腺特異性抗原PSA的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710131799.1
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106932570A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 肖建如;李博;周娉婷;陳天睿;魏海峰;蔡維濼;由賀;李嵩
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532;G01N35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙)31262
• 代理人: 周春洪

技術領域

本發明涉及免疫分析技術領域，具體地說，是一種檢測前列腺特異性抗原PSA的試劑盒及其應用。

背景技術

前列腺特異性抗原PSA(Prostate)是一種含有237個氨基酸的單肽鏈糖蛋白，分子量約34kDa，屬于具有組織特異性的具有糜蛋白酶樣作用的絲氨酸蛋白酶族。PSA主要由前列腺的線上皮細胞產生，在精液中的濃度很高。PSA的主要生理作用是分解精液中的膠狀蛋白，有稀釋精液，增加精子運動能力的作用。最初分泌到前列腺管的PSA是一種無活性的酶原(proPSA)，酶原在氨基裂解掉7個氨基酸后具有絲氨酸蛋白酶活性。少量PSA可進入血循環，進入血循環的大部分PSA迅速與蛋白酶抑制素結合而失活，主要與α-1抗糜蛋白酶(ACT)和α-2巨球蛋白結合(MG)，也有少部分被蛋白水解酶滅活后以游離狀態存在。游離的PSA以及和ACT結合的PSA(PSA-ACT)通過現有免疫學方法可以檢測到。同時檢測游離PSA和PSA-ACT復合物即為目前所說的總PSA檢測。與α-2巨球蛋白結合(MG)的PSA由于蛋白的包裹、遮蔽作用使PSA特異性表位消失，因此用現有免疫學方法無法檢測。血清總PSA含量和前列腺疾病密切相關，良性前列腺增生和惡性的前列腺癌都會引起總PSA升高，游離PSA則較少受前列腺癌生長的影響。PSA具有組織特異性，但并無腫瘤特異性，前列腺炎、良性前列腺增生和前列腺癌均可導致PSA升高。

前列腺癌已超過皮膚癌成為北美男性最常見的癌癥，因癌致死病例數排第二位。PSA在大多數有臨床癥狀的前列腺癌中都會升高，因此監測PSA含量對于評估腫瘤治療效果有重要意義。目前PSA的檢測全部采用免疫學方法，膠體金試紙條法及化學發光法，免疫學方法靈敏度不高，膠體金試紙條靈敏度不高且需要借助人眼識別，化學發光法成本較高。進口單抗由于靈敏度高、精密度高、準確性好、使用靈活方便等，在市場上占據領先地位。

中國專利201210291449.9公開了一種前列腺特異性抗原檢測試劑盒，包括抗-FITC抗體包被的固相載體、FITC標記的anti-PSA抗體、酶標記的anti-fPSA抗體、上述酶所作用的化學發光底物、以及陰性和陽性對照液；制備上述試劑盒的方法包括以下步驟：1)以抗-FITC抗體包被的固相載體；2)用FITC標記anti-PSA抗體，獲得FITC標記的anti-PSA抗體；3)用酶標記anti-fPSA抗體，獲得酶標記的anti-fPSA抗體；4)分裝和組裝。中國專利201110235581.3公開了游離前列腺特異性抗原定量測定試劑盒，包含FPSA磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，FPSA標準品、FPSA質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。然而現有技術中，關于本發明檢測前列腺特異性抗原PSA的試劑盒，目前還未見報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒。

本發明的另一個目的是，提供如上所述試劑盒的用途。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，包括如下檢測試劑：

(1)PSA試劑1號成分：

(2)PSA試劑2號成分：

進一步，所述試劑盒還包括PSA質控品，所述PSA質控品為含PSA抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述PSA抗原提取自人精液。

進一步，所述試劑盒還包括PSA校準品，所述PSA校準品為含PSA抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述PSA抗原提取自人精液。

進一步，所述PSA膠體金的標記方法如下：

(1)用0.1mol/LK₂CO₃或0.1mol/LHCl調節金溶膠至pH6.8；

(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的PSA抗體溶液，攪拌2～3分鐘；

(3)加入5ml 1％PEG20000溶液；

(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液；

(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/ml PEG20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復，濃度以A1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存；

(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于Sephadex G-200柱進行凝膠層析分離純化，以含0.1％BSA的緩沖溶液洗脫。

進一步，所述金溶膠的制備方法如下：

(1)膠體金的燒制應在24小時內完成；