[發(fā)明專利]同步檢測伏馬毒素B1等四種真菌毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710131789.8
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106940373B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李培武;張兆威;王督;唐曉倩;張奇;張文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發(fā)明涉及同步檢測伏馬毒素B1等四種真菌毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應(yīng)用。其包括免疫層析時間分辨熒光試紙條和含有銪標(biāo)記的各單克隆抗體凍干品的樣品反應(yīng)瓶；其中：所述熒光試紙條包括PVC襯底，襯底的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線和四條檢測線，分別包被各毒素的牛血清白蛋白偶聯(lián)物，所述伏馬毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC NO.C201636的雜交瘤細胞株Fm7A11分泌產(chǎn)生。可用于黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1含量的同步檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及真菌毒素免疫層析時間分辨熒光試劑盒，具體涉及一種同步檢測黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒、制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

真菌毒素是一類毒性很強的化學(xué)物質(zhì)，是絲狀真菌在適宜的環(huán)境條件下產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。真菌毒素廣泛污染玉米、小麥、大米、花生等谷類作物和油料作物、飼料等多種農(nóng)產(chǎn)品食品。黃曲霉毒素B1是由黃曲霉菌和寄生曲霉等產(chǎn)生的一類有毒的次生代謝產(chǎn)物，具有高度毒性和高致癌、致畸、致突變性的特性，對人類和動物危害極大。赭曲霉毒素A主要產(chǎn)生于曲霉屬和青霉屬一些產(chǎn)毒菌株，其毒性位居7種赭曲霉毒素(A、B、C、D等7種)之首，在自然界分布最廣泛，對農(nóng)產(chǎn)品的污染也最嚴(yán)重，是嚴(yán)重危害人類健康的真菌毒素之一；赭曲霉毒素A在食物中較穩(wěn)定且不易分解，在霉變谷物、飼料等中最常見，現(xiàn)已被證明具有誘變性、免疫毒性，能引起免疫抑制，并具有致癌、致畸、致突變作用。玉米赤霉烯酮是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種非類固醇結(jié)構(gòu)的真菌毒素，是我國飼料原料和全價飼料中超標(biāo)率和檢出水平最高的真菌毒素之一，對繁殖機能有毒害作用，還具有肝毒性、腎毒性、免疫毒性、細胞毒性和遺傳毒性，且對腫瘤的發(fā)生有顯著相關(guān)性。伏馬毒素B1主要產(chǎn)生于串珠鐮孢、多育鐮孢、輪狀鐮孢和其他鐮孢菌，具有強神經(jīng)毒性、肝毒性和致癌致畸性等，其毒性機理主要來源于伏馬毒素B1對神經(jīng)鞘脂類合成破壞和氧化應(yīng)激。而我國小農(nóng)戶分散型的種植方式導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素發(fā)生率高，且同一農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素混合污染的可能性大，因此迫切需要能快速、同步檢測真菌毒素混合污染的檢測技術(shù)，以實現(xiàn)對糧食及飼料中真菌毒素混合污染的同步、快速監(jiān)測。

現(xiàn)有對這些真菌毒素的檢測方法主要包括薄層層析法、精密儀器分析法和免疫學(xué)分析法。薄層層析法檢測真菌毒素是最早研究建立的真菌毒素分析方法，主要用于真菌毒素定性分析，難以定量，檢測試劑用量大、操作繁瑣、并由于其它組分干擾嚴(yán)重導(dǎo)致準(zhǔn)確性差，不能準(zhǔn)確定量，對實驗人員和周圍環(huán)境污染危害較大。精密儀器分析法包括高效液相色譜法、液相色譜與質(zhì)譜及串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法等方法，具有準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點，但樣品前處理過程復(fù)雜，檢測時間長，所使用的儀器昂貴，對實驗環(huán)境和檢測人員要求高，難以實現(xiàn)快速檢測。免疫分析方法克服了薄層層析法和儀器分析法的缺點，由于其特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、成本低、對實驗人員和周圍環(huán)境的污染危害小、適于現(xiàn)場批量檢測等優(yōu)點在近年來獲得了快速發(fā)展。基于膠體金標(biāo)記抗體與抗原特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫層析試紙條由于其檢測結(jié)果肉眼可見，不需要大型儀器設(shè)備，檢測成本低，分析時間短，近年來在真菌毒素等微量殘留物的定性、在線、快速檢測上得到了廣泛應(yīng)用。但是由于靈敏度低、無法進行定量檢測，在現(xiàn)場快速檢測中無法滿足快速定量檢測的需求。而我國小農(nóng)戶分散型的種植方式導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素發(fā)生率高，且混合污染的風(fēng)險性更大，因此迫切需要能快速、同步檢測多種真菌毒素混合污染的檢測技術(shù)，以實現(xiàn)對糧食及飼料中真菌毒素混合污染的同步、快速監(jiān)測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的問題是提供一種能同步檢測黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒、制備方法及其應(yīng)用。該免疫層析時間分辨熒光試劑盒可用于黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1含量的同步檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：