[發明專利]同步檢測伏馬毒素B1等四種真菌毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710131789.8
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106940373B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 李培武;張兆威;王督;唐曉倩;張奇;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.同步檢測黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：它包括免疫層析時間分辨熒光試紙條和含有銪標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體、銪標記的赭曲霉毒素A單克隆抗體、銪標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體、銪標記的伏馬毒素B1單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶；其中：所述的免疫層析時間分辨熒光試紙條包括PVC襯底，襯底的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和四條檢測線，所述質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述四條檢測線上分別包被黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物、赭曲霉毒素A-牛血清白蛋白偶聯物、玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶聯物、伏馬毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物，所述的伏馬毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC NO. 201636的雜交瘤細胞株Fm7A11分泌產生的單克隆抗體；所述的雜交瘤細胞株Fm7A11已于2016年3月29日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC NO. 201636。

2.根據權利要求1所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述銪標記的單克隆抗體是按照以下方法制備得到：

銪標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體：將黃曲霉毒素B1單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合、振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑可偶聯黃曲霉毒素B1單克隆抗體：30μg-80μg；

銪標記的赭曲霉毒素A單克隆抗體：將赭曲霉毒素A單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合、振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的赭曲霉毒素A單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑可偶聯赭曲霉毒素A單克隆抗體：40μg-90μg；

銪標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體：將玉米赤霉烯酮單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合，振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑可偶聯玉米赤霉烯酮單克隆抗體：30μg-90μg；

銪標記的伏馬毒素B1單克隆抗體：將伏馬毒素B1單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合，振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的伏馬毒素B1單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑可偶聯伏馬毒素B1單克隆抗體：30μg-80μg。

3.根據權利要求2所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：銪標記試劑的活化方法為取銪標記試劑用pH 8.2 0.2mol/L的硼酸緩沖液中超聲分散，然后緩慢加入碳二亞胺溶液，室溫振蕩活化，離心去上清液，用pH 8.2 0.2mol/L的硼酸緩沖液復溶，備用，活化時間為15-30min。

4.根據權利要求1所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述熒光試紙條中的吸水墊長10-16mm，寬3-5mm；檢測墊長25-30mm，寬3-5mm；樣品墊長12-18mm，寬3-5mm，相鄰各墊的交疊長度為1-3mm；所述熒光試紙條中檢測墊上靠近質控線的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為5-10mm，每相鄰兩條檢測線之間的間距為1.5-4.5mm，靠近質控線的檢測線與質控線的間距為3-5mm；所述的樣品反應瓶為1-2.5mL的西林瓶。

5.根據權利要求1所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述包被黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的檢測線上每厘米所需要的黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為50-250ng；包被赭曲霉毒素A-牛血清白蛋白偶聯物的檢測線上每厘米所需要的赭曲霉毒素A-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為100-300ng；包被玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶聯物的檢測線上每厘米所需要的玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為100-300ng；包被伏馬毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的檢測線上所需要的伏馬毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的包被量為50-150ng，每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為50-150ng。