[發明專利]同步檢測五種真菌毒素的層析時間分辨熒光試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201710131289.4
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106932370B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 張兆威;李培武;張奇;王督;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發明涉及同步檢測黃曲霉毒素B1等五種真菌毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒及應用。其包括免疫層析時間分辨熒光試紙條和含有銪標記的各單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶；其中熒光試紙條包括PVC襯底，襯底的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，自上而下設置橫向質控線和5條檢測線，分別包被各毒素的牛血清白蛋白偶聯物，伏馬毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC NO.C201636的雜交瘤細胞株Fm7A11分泌產生。可用于黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、雜色曲霉毒素混合污染的同步檢測，操作簡單、快速、靈敏度高。

技術領域

本發明涉及真菌毒素免疫層析時間分辨熒光試劑盒，具體涉及一種同步檢測黃曲霉毒素B1等五種真菌毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒及應用。

背景技術

真菌毒素是真菌在糧油或飼料中生長代謝所產生的一系列有毒有害物質，目前在自然界中已發現的真菌毒素多達400多種。按照主要產毒菌種，真菌毒素可以分為曲霉菌毒素(如黃曲霉毒素、雜色曲霉毒素等)、青霉菌毒素和鐮刀菌毒素(如玉米赤霉烯酮等)等幾大類。真菌毒素具有致癌、致畸、致突變的作用，可引起人體的急性或慢性中毒，嚴重危害人體健康。真菌毒素污染農作物、食品及飼料，給人類和家畜的生命健康帶來巨大威脅。為了保障糧食衛生安全，我國對糧食中的真菌毒素制定了相關的限量標準(GB 2761—2011)。當前污染農產品食品及飼料等的主要真菌毒素包括黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、雜色曲霉毒素。黃曲霉毒素主要出現在谷物和豆類植物中，若禽類接觸到被黃曲霉毒素污染后的飼料，則在牛奶、奶制品、雞蛋和肉類中也會檢測到黃曲霉毒素。黃曲霉毒素主要通過食物消化感染，長期的皮膚接觸也會造成慢性感染，引發急性或者慢性肝損傷、急性肝炎、肝細胞脂肪變性，最終導致肝癌。伏馬毒素是由串珠鐮刀菌產生的水溶性代謝產物，主要由多氫醇和丙三酸組成雙酯類化合物，現已發現11種伏馬毒素，其中伏馬毒素B1危害最嚴重，主要感染玉米、高粱、大米等農作物。伏馬毒素是一種致癌劑，引發腦水腫，腦壞死以及肝臟毒性，嚴重損傷免疫系統。赭曲霉毒素主要感染谷類農作物以及豆類植物，如玉米、大麥、小麥、咖啡豆、豌豆、可可豆等。赭曲霉毒素在機體內胃腸道，如十二指腸、空腸段被吸收，具有強腎毒性。玉米赤霉烯酮污染廣泛，在世界各大洲的谷物以及農副產品中都能都檢測到，多污染玉米、燕麥、小麥、大麥、小米等農產品食品，以及奶制品、牛肉等食品。雜色曲霉毒素主要是由黃曲霉、雜色曲霉、構巢曲霉、細皺曲霉等真菌產生的次級代謝產物，其毒性僅次于黃曲霉毒素，可誘發肝癌、肺癌及其他腫瘤

目前，真菌毒素的檢測方法主要有薄層色譜法、酶聯免疫法、液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法。薄層色譜法簡捷、便利，但重現性差、精度低；酶聯免疫法特異性強、前處理簡單，但假陽性率高，不能作為確證方法；液相色譜、液相色譜-質譜聯用法穩定性好、靈敏度較高，但樣品前處理過程復雜，檢測時間長，所使用的儀器昂貴，對實驗環境和檢測人員要求高，難以實現快速檢測。免疫層析熒光檢測技術是20世紀80年代初期開發的一種免疫分析方法，它是在單克隆抗體技術、熒光標記免疫技術和新材料技術基礎上發展起來的快速檢測技術。該技術以微孔膜為固相載體，將已知的特異性抗原固定于硝酸纖維素膜上作為檢測線。當加入待測樣品后，樣品經毛細管的擴散作用首先與免疫探針相結合，并繼續層析至檢測線，標記物與待測物的復合物被檢測線的抗原截獲，從而呈現熒光條帶。該法具有快速、靈敏度高、特異性強、穩定性好、操作簡單等優點，結果判斷直觀可靠，容易被基層單位人員掌握，適合現場快速篩查和基層大面積推廣，特別適合農產品食品及飼料等領域迫切需要的能快速、同步檢測真菌毒素混合污染的檢測技術，以實現對農產品食品及飼料中真菌毒素混合污染的同步、快速監測。

發明內容

本發明所要解決的問題是提供一種能同步檢測黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、雜色曲霉毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒、制備方法及其應用。該免疫層析時間分辨熒光試劑盒可用于黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、雜色曲霉毒素含量的同步檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。