[發(fā)明專利]同步檢測五種真菌毒素的層析時間分辨熒光試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710131289.4
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106932370B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張兆威;李培武;張奇;王督;張文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.同步檢測黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、雜色曲霉毒素混合污染的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：它包括免疫層析時間分辨熒光試紙條和含有銪標(biāo)記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體、銪標(biāo)記的伏馬毒素B1單克隆抗體、銪標(biāo)記的赭曲霉毒素A單克隆抗體、銪標(biāo)記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體、銪標(biāo)記的雜色曲霉單克隆抗體凍干品的樣品反應(yīng)瓶，其中：所述的免疫層析時間分辨熒光試紙條包括PVC襯底，襯底的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線和5條檢測線，所述質(zhì)控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述5條線上分別包被黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物、伏馬毒素B1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物、赭曲霉毒素A-牛血清白蛋白偶聯(lián)物、玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶聯(lián)物、雜色曲霉毒素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，所述的伏馬毒素B1單克隆抗體為由保藏編號CCTCC NO.C201636的雜交瘤細(xì)胞株Fm7A11分泌產(chǎn)生的單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述銪標(biāo)記的單克隆抗體是按照以下方法制備得到：

銪標(biāo)記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體將黃曲霉毒素B1單克隆抗體和活化后的銪標(biāo)記試劑在硼酸緩沖液中混合、振蕩反應(yīng)，然后經(jīng)離心、復(fù)溶、封閉步驟得到目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體；1mL活化后的銪標(biāo)記試劑可偶聯(lián)黃曲霉毒素B1單克隆抗體：30μg-80μg；

銪標(biāo)記的赭曲霉毒素A單克隆抗體將赭曲霉毒素A單克隆抗體和活化后的銪標(biāo)記試劑在硼酸緩沖液中溶解、振蕩反應(yīng)，然后經(jīng)離心、復(fù)溶、封閉步驟得到目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的赭曲霉毒素A單克隆抗體；1mL活化后的銪標(biāo)記試劑可偶聯(lián)赭曲霉毒素A單克隆抗體：40μg-90μg；

銪標(biāo)記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體將玉米赤霉烯酮單克隆抗體和活化后的銪標(biāo)記試劑在硼酸緩沖液中溶解、振蕩反應(yīng)，然后經(jīng)離心、復(fù)溶、封閉步驟得到目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體；1mL活化后的銪標(biāo)記試劑可偶聯(lián)玉米赤霉烯酮單克隆抗體：30μg-90μg；

銪標(biāo)記的伏馬毒素B1單克隆抗體將伏馬毒素B1單克隆抗體和活化后的銪標(biāo)記試劑在硼酸緩沖液中溶解、振蕩反應(yīng)，然后經(jīng)離心、復(fù)溶、封閉步驟得到目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的伏馬毒素B1單克隆抗體；1mL活化后的銪標(biāo)記試劑可偶聯(lián)伏馬毒素B1單克隆抗體：30μg-80μg；

銪標(biāo)記的雜色曲霉單克隆抗體將雜色曲霉單克隆抗體和活化后的銪標(biāo)記試劑在硼酸緩沖液中溶解、振蕩反應(yīng)，然后經(jīng)離心、復(fù)溶、封閉步驟得到目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的雜色曲霉單克隆抗體；1mL活化后的銪標(biāo)記試劑可偶聯(lián)雜色曲霉單克隆抗體：30μg-80μg。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述的活化方法為取銪標(biāo)記試劑，用pH8.2 0.2mol/L的硼酸緩沖液中超聲分散，然后緩慢加入碳二亞胺溶液，室溫振蕩活化，離心去上清液，用pH8.2 0.2mol/L的硼酸緩沖液復(fù)溶，備用，所述的活化時間為15-30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述免疫層析時間分辨熒光試紙條中的吸水墊長10-16mm，寬3-5mm；檢測墊長25-33mm，寬3-5mm；樣品墊長12-18mm，寬3-5mm，相鄰各墊的交疊長度為1-2mm；所述免疫層析時間分辨熒光試紙條中檢測墊上靠近質(zhì)控線的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為5-10mm，每相鄰兩條檢測線之間的間距為1.5-4.5mm，靠近質(zhì)控線的檢測線與質(zhì)控線3-6mm；所述的樣品反應(yīng)瓶為1-5mL的卡口瓶。