[發明專利]n?3PUFA磷脂在改善慢性疲勞綜合征制品中的應用

在審

• 申請號: 201710130672.8
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106880049A
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發明（設計）人: 王玉明;王丹;徐杰;薛勇;薛長湖;李兆杰;王靜鳳;常耀光;唐慶娟
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: A23L33/115
• 分類號: A23L33/115;A61K31/685;C07F9/10;A61P39/00
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司37201
• 代理人: 孫洪葉

技術領域

本發明屬于活性物質篩選技術領域，涉及n-3PUFA磷脂在改善慢性疲勞綜合征制品中的應用，具體涉及海參磷脂和魷魚卵磷脂在預防、改善或治療慢性疲勞綜合征失調制品中的應用。

背景技術

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome，CFS)，又稱為慢性疲勞免疫功能障礙綜合征，是亞健康狀態的一種特殊表現。以長期嚴重的疲勞感(至少半年以上)為突出臨床表現，并伴有失眠、記憶力下降、骨豁肌疼痛及多種精神神經癥狀，但無其他器質性及精神性疾病為特征的一組復雜的功能紊亂證候群。國內調查顯示CFS人群發病率約在0.007％～2.8%，大部分患者年齡在30～50歲。本病已經被美國疾病控制與預防中心預測為21世紀影響人類健康的主要問題之一，雖然沒有近期生命危險，但是嚴重影響患者的身心健康，造成生活質量下降，繼而影響社會生產力和勞動力，占用醫療資源，因此已引起全社會的廣泛關注。

目前治療慢性疲勞綜合征的藥物的治療效果有限，且治標不治本，還可能引起副作用，人們傾向于選擇服用具有預防、減緩或治療慢性疲勞綜合征的功能成分或功能食品來達到減緩運動失調的目的，因此開發安全有效的具有預防、減緩或治療慢性疲勞綜合征的功能成分成為迫切要求。

DHA和EPA是兩種常見的n-3系列不飽和脂肪酸，目前市場上的EPA/DHA產品主要為乙酯型和甘油酯型，而乙酯型EPA/DHA在人體中不僅消化和吸收比較困難，且可能存在安全隱患，因此甘油酯型EPA/DHA備受消費者歡迎。近年有研究表明，存在于磷脂中的不飽和脂肪酸相對于甘油酯型不飽和脂肪酸，不僅氧化穩定性更好，而且消化吸收速度更快，再加上磷脂本身具有改善脂肪代謝、增強免疫力等活性，因此富含EPA/DHA的磷脂可能成為代替甘油酯型EPA/DHA的新型脂質保健產品。

發明內容

本發明的目的是提供一種n-3PUFA磷脂在改善慢性疲勞綜合征制品中的應用。具體從海參中提取EPA磷脂，從魷魚卵中提取DHA磷脂，并對EPA和DHA磷脂進行各組分的具體制備，最后對各組分的EPA和DHA磷脂進行抗疲勞試驗驗證。

為達到上述目的，本發明采取的具體技術方案為：

n-3PUFA磷脂在改善慢性疲勞綜合征制品中的應用。

進一步的，所述的n-3PUFA磷脂包括EPA磷脂和DHA磷脂。

進一步的，所述EPA磷脂為EPA磷脂酰膽堿（EPA-PC）、EPA磷脂酰乙醇胺（EPA-PE）、EPA磷脂酰絲氨酸（EPA-PS）、EPA磷脂酰肌醇（EPA-PI）的一種或多種混合。

進一步的，所述DHA磷脂為DHA磷脂酰膽堿（DHA-PC）、DHA磷脂酰乙醇胺（DHA-PE）、DHA磷脂酰絲氨酸（DHA-PS）和DHA磷脂酰肌醇（DHA-PI）中的一種或多種混合。

進一步的，所述EPA磷脂的制備方法包括以下步驟：

1）海參經真空冷凍干燥粉碎后，制成粉末；

2）取海參干粉，在氯仿和甲醇的混合溶液中抽提過夜，過濾后，用氯化鉀溶液抽提，靜置分層，收集氯仿層，經減壓濃縮得到海參脂質粗提取物；

3）將硅膠經活化裝柱后，用氯仿平衡硅膠柱 ；再將步驟 2）得到的海參脂質粗提物用氯仿溶解后，緩慢倒入硅膠柱中，依次用氯仿、氯仿-甲醇混合液、丙酮和甲醇進行洗脫，收集洗脫液，洗脫液進行薄層硅膠板層析 (TLC)，并用碘和Dittmer試劑顯色確認后減壓濃縮去除殘留有機溶劑即得到海參磷脂；

其中，收集氯仿-甲醇的洗脫液為EPA磷脂酰乙醇胺（EPA -PE），收集甲醇的洗脫液為EPA磷脂酰膽堿（EPA-PC）；

4）將醋酸/醋酸鈉溶液緩沖液放入集熱式恒溫加熱磁力攪拌器中預熱，將 L-絲氨酸溶于其中，加入上述步驟3）中的EPA -PC，最后加入PLD，在 40 ℃下攪拌反應，加入 HCl、滅活酶，反應終止，用正己烷-異丙醇提取反應產物，即得到EPA磷脂酰絲氨酸（EPA -PS）；

5）將步驟 2）中海參脂質粗提取物，加入丙酮、三甲胺和乙酸酐，冷卻過濾后，用丙酮洗脫，得到EPA磷脂酰肌醇（EPA-PI）。

進一步的，所述DHA磷脂的制備方法包括以下步驟：

1）魷魚卵經真空冷凍干燥粉碎后，制成粉末；

2）取魷魚卵干粉，在氯仿和甲醇混合溶液中抽提過夜，過濾后，用氯化鉀溶液抽提，靜置分層，收集氯仿層，經減壓濃縮得到魷魚卵脂質粗提取物；